[发明专利]一种特异性白念珠真菌荧光染色液及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种特异性白念珠真菌荧光染色液及其制备方法和应用。每1L特异性白念珠真菌荧光染色液中含有：粘附肽原液0.05～0.15g、链霉亲和素‑荧光素复合物0.05～1g、渗透剂5～25g、稳定剂30～225g、抗猝灭剂0.5～25g。本发明以水为溶剂，其它所有的成分均匀分散于水中，可稳定共存于同一体系中，在生产、销售、使用过程中，更加方便快捷；本发明提供的特异性白念珠真菌荧光染色液可以特异性检测白念珠菌，稳定性高；本发明染色液中的荧光基团为蓝光激发和绿光发射，有利于减小紫外伤害，利于镜检观察；本发明提供的制备方法步骤简单，反应条件温和，仅需在常温下搅拌即可完成。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及一种特异性白念珠真菌荧光染色液及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，随着广谱抗生素、抗肿瘤化疗、免疫抑制剂等药物的广泛应用，条件致病性真菌感染，特别是深部真菌感染的发病率呈明显上升趋势。白念珠菌是最常见的条件致病性共生真菌之一，是健康人体微生物群的一部分，存在于宿主的口腔、表皮、胃肠道及阴道等处，在免疫功能低下的患者中可引起严重和频繁的粘膜念珠菌感染，如口腔和阴道的念珠菌病(VVC)或系统性念珠菌血症。感染后病情发展快，在国内综合医院白念珠菌感染病死率达37.7％。目前治疗真菌感染的有效手段仍是抗生素类药物治疗，而与其他微生物相比，念珠真菌的结构更加复杂，拥有细胞壁结构，而且感染无特异性临床表现，极易导致漏诊误诊，影响疾病的治疗。因此对白念珠菌感染的早期发现和准确鉴定对于临床给药治疗以及流行病学研究意义重大。

传统的真菌实验室诊断方法主要包括真菌分离培养法、组织病理鉴定、PCR法等，病理鉴定的特异度和灵敏度均较低，同时检测周期长，不能快速将白念珠菌与其他念珠菌区分，存在诊断给药延迟的可能；真菌分离培养法特异度高，能分辨菌属，但取材要求高，培养要求高，检测周期长，有假阴性；PCR法耗时长，需要较高的实验室条件，无法推广普及。临床常用的真菌快速检测方法有KOH湿片法、真菌镜检、革兰氏染色法、荧光检测法等。其中KOH湿片法操作简单，常有各种杂质导致视野背景较杂乱，非常依赖检测人员的经验与技术水平但灵敏度、特异性及准确率低；革兰氏染色法操作较为复杂，结果不准确，无法确认是否为真菌感染，而其他创伤性诊断手段常受到患者病情和身体状况的限制。

荧光检测法是一种已有较多应用的快速检测真菌方法。市场上流通的荧光检测真菌试剂盒，主要成分为荧光试剂、促溶剂和背景染料。目前常用的荧光试剂为CalfluorWhite(CFW),能与真菌细胞壁内的几丁质成分结合，在紫外的激发下发生蓝色荧光。但CFW特异性结合能力较差，可以与大部分真菌结合，需要另外人工判断菌属，同时淬灭时间短，能使背景组织发出明亮的荧光，影响真菌与背景的判断。所以CFW一般需要联合背景染料以去除背景干扰，利用促溶剂分解待测样品角质层。后来市场上出现利用重组几丁质酶标联的荧光素试剂盒检测真菌，此类方法提高了特异性和稳定性，但是生物酶较容易失活不易保存，而且几丁质酶检测法是广谱真菌检测方法，不能特异性识别白念珠菌。因此，有必要提供一种高特异性、高灵敏度的特异性白念珠真菌荧光染色液，以解决现有技术中的不足。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性白念珠真菌荧光染色液及其制备方法和应用，以解决上述技术问题。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

第一方面，本发明提供了一种特异性白念珠真菌荧光染色液，每1L特异性白念珠真菌荧光染色液中含有：粘附肽原液0.05～0.15g、链霉亲和素-荧光素复合物0.05～1g、渗透剂5～25g、稳定剂30～225g、抗猝灭剂7～35g。

优选的，所述粘附肽原液中粘附肽的序列为APKLRIPSLK-biotin，分子结构式如I所示：

优选的，所述粘附肽原液是由粘附肽粉末和含有二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液配制成的。