[发明专利]用于N末端脑利钠肽前体检测的组合物和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法

说明书

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及N末端脑利钠肽前体(NT‑proBNP)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法。本发明采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，重复性好，检测范围宽。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

技术领域

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于N末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)检测的组合物，该组合物的应用，包含该组合物的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒，以及基于该组合物或试剂盒的磁微球电化学发光免疫检测方法。

背景技术

ProBNP主要由心室分泌，可用于诊断和对预后的预测，是最有力的能独立预测急性冠脉综合征患者在一年内死亡率的预测物。血清和血浆中NT-proBNP的浓度与左室功能不全的预后有关。

左室功能不全通常伴随冠心病、动脉高压、心瓣膜病和原发性心肌病而发生。如果左室功能不全未得到及时治疗而使其进一步发展，患者的死亡率增高。其NT-proBNP水平随着级数的增加而升高，反映了心脏损害的严重程度。NT-proBNP的高灵敏度也使其可以监测罹患器质性心脏病无症状患者的轻度心脏功能障碍。过去常用临床信息与成像的方法诊断左室功能不全，已经证明利钠肽在控制心血管系统功能中的意义。

另外，NT-proBNP适用于血管重建的评价，因此有助于个体恢复步骤的建立。NT-proBNP还可反映心脏功能，并表明准备采用心脏毒性药物或导致液体潴留或体积过载(如COX-2抑制剂、非类固醇消炎药)的干预措施的病人风险增加。

到目前为止，用于检测人血清中NT-proBNP的方法主要有：酶联免疫法(ELISA)和酶促磁微粒化学发光。本发明采用方法为电化学发光法，采用三联吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，三联吡啶钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，检测范围宽，重复性好。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

发明内容

本发明提供了一种用于N末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法，具有生产效率高、检测时间短、适用于全自动检测，具有更高的灵敏度、线性范围宽等优点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了用于N末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)检测的组合物，包括NT-proBNP试剂Ra、NT-proBNP试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；

所述NT-proBNP试剂Ra包括含生物素标记的抗NT-proBNP单克隆抗体；

所述NT-proBNP试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗NT-proBNP单克隆抗体；

所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。

在本发明的一些具体实施方案中，所述超顺磁微球的粒径在1.5～5.0μm。

在本发明的一些具体实施方案中，所述NT-proBNP试剂Ra中，每个抗体分子表面的生物素分子标记量为2～5个；所述NT-proBNP试剂Rb中，每个抗体分子表面的钌分子标记量为2～10个。

在本发明的一些具体实施方案中，所述NT-proBNP试剂Ra的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗NT-proBNP单克隆抗体与生物素混合，制得所述NT-proBNP试剂Ra；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。