[发明专利]一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程

权利要求书

1.一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：该检测方法使用到的原料和器材包括：组织粉碎机、容器、离心管、盐酸溶液、匀浆机、2-硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂、恒温水浴锅、KH2PO4溶液、KOH溶液、乙酸乙酯、振荡器、吹氮浓缩仪和吹氮管；

该同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法包括如下步骤：

S1：将水产品组织样品、盐酸溶液和2-硝基苯甲醛混合，在水浴条件下进行衍生化，得到衍生液；

S2：将所述衍生液、磷酸二氢钾、氢氧化钾和乙酸乙酯进行混合，进行提取，得到提取液；

S3：采用正己烷对所述提取液进行净化，将所得净化液进行浓缩，得到浓缩液；

S4：对所述浓缩液中硝基呋喃代谢物和氯霉素的残留量进行检测；

S5：将所述浓缩液用1ml纯净水溶解，得到待测液，将所述待测液经0.22μm滤膜过滤后，采用液相色谱-串联质谱仪进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述硝基呋喃代谢物包括呋喃它酮代谢物、呋喃唑酮代谢物、呋喃妥因代谢物和呋喃西林代谢物。

3.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所有试剂均为分析纯水，且为GB/T6682规定的一级水。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述硝基呋喃类药物代谢物衍生物的色谱条件包括：

色谱柱：菲罗门C18，150mm×2.0mm（id），粒度5µm，luna；

流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液。

5.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述氯霉素的液相色谱条件包括：

色谱柱：菲罗门C18，150mm×2.0mm（id），粒度5µm，luna；

流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液。

6.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述甲酸水溶液为现用现配，且配制方法优选为将1ml色谱纯甲酸溶于水中，并且定容至1000ml。

7.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述乙腈为色谱纯乙腈，且甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷均为高效液相色谱级。

8.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述盐酸溶液的浓度为0.2Mol/L，且邻硝基苯甲醛的溶液的浓度为100mMol/L，并且磷酸二氢钾溶液的浓度为0.1Mol/L，而且衍生化的温度为60℃，同时时间为0.5h。

9.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的操作流程，其特征在于：包括如下步骤：

第一步，试样制备：虾去壳取虾肉，用组织粉碎机匀质，装入洁净容器内，密封，标记，并在-18℃保存，每份样品量不少于100g；

第二步，提取步骤：称取经肉类组织粉碎机粉碎的试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10mL0.2Mol/L盐酸溶液在匀浆机上以16000r/min速度匀浆15秒，用5mL0.2Mol/L盐酸溶液洗涤匀浆刀，合并提取液；

第三步，样品恒温孵育：离心管中加入400μL100mMol/L新配制的2-硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂振荡1分钟；放在60℃恒温水浴锅中反应0.5小时，孵育过程要注意避光操作；

第四步，样品提取：离心管在4500r/min下离心10min，上清液转入另一离心管中，残渣弃去，上清液中加入5mL0.1Mol/LKH2PO4溶液，用1Mol/LKOH溶液调节pH值在7～7.5范围，离心管中加入10mL乙酸乙酯，在振荡器上震荡5分钟，以4500r/min速度离心10min；

第五步，净化方法：吸取5mL上层清液（相当于1g样品）移至吹氮浓缩仪的吹氮管中，在50℃下用氮气将试管内的溶剂挥干，残渣用1mL纯净水溶解，漩涡振荡器上混漩60秒，加入3mL正己烷，漩涡振荡器上混漩60秒，在4500r/min下离心10min后，样液经0.22μm滤膜过滤后上机测定。