[发明专利]一种添加微粒促进牛樟芝液态发酵生产活性物质的方法

说明书

本发明公开了一种促进牛樟芝液态发酵生产活性物质的方法，属于微生物发酵技术领域。本发明接种牛樟芝种子培养液于液态发酵培养液后，在20‑35℃发酵7‑21d，其在发酵后的第0h向发酵培养液中添加2g/L的滑石粉，以促进牛樟芝在生长过程中合成活性物质Antrodin C和Antroquinonol。本发明通过这种有效调控，可以提高牛樟芝液态发酵Antrodin C和Antroquinonol的生物合成能力，仅通过较低的成本投入，就可显著提高发酵合成目标产物的浓度，方便实用，且具有很高的经济效益。

技术领域

本发明涉及一种添加微粒促进牛樟芝液态发酵生产活性物质的方法，属于微生物发酵技术领域。

背景技术

牛樟芝，又名樟芝、牛樟菇等，是一种中国台湾特有的珍稀食药两用真菌，素有森林红宝石之称。在民间，牛樟芝作为传统珍贵药材，具有解酒保肝，治疗中毒及肿瘤疾病等功效。近年来，学者已从牛樟芝中分离纯化出了近百种生理活性物质，主要可分为三萜类化合物、多糖类化合物、泛醌类衍生物以及马来酸和琥珀酸衍生物等几大类。

Antrodin C属于马来酸以及琥珀酸衍生物，具有很好的抗癌和保肝的活性，是继1968年 Wagner发现水飞蓟素以来，在天然物中发现的具有超过水飞蓟素保肝活性的物质。Antroquinonol是牛樟芝中最重要的泛醌衍生物之一，具有很强的生物活性，可用于治疗多种癌细胞，包括肝癌，白血病，肺癌，乳腺癌和胰腺癌等，已完成FDA二期临床实验，因此它们都具有很好的应用前景，但由于Antrodin C和Antroquinonol是牛樟芝胞内产物且不易透过细胞膜分泌至胞外，存在产物抑制作用，普通液态发酵中它们的产量较低。已有研究者通过液态发酵条件优化、添加原位萃取剂、氧化胁迫等调控方式，在一定程度上提高了Antrodin C 和Antroquinonol的产量，但仍存在产物后处理困难，添加成本较高，及产量依旧较低等问题。

虽然，记载于公开号为CN108374029B的中国发明专利文本中，以添加氧化胁迫剂以提高Antrodin C的产量，但是，氧化胁迫剂有些存在一定的细胞毒性，有些易燃易爆，在使用过程存在安全性问题。

因此，关于如何进一步提高牛樟芝液态发酵中活性物质的产量并减小发酵成本，仍有很多问题需要进一步解决。

发明内容

技术问题：

本发明要解决的技术问题是：提供一种提高牛樟芝液态发酵中活性物质的产量并减小发酵成本。

技术方案

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种采用牛樟芝发酵生产活性物质的方法，将牛樟芝接种至发酵培养基中，在发酵0-168h添加微粒；所述微粒包括四氧化三铁、滑石粉、二氧化钛、二氧化硅、氧化铝。

本发明的原理为：微粒的添加可以使发酵过程存在菌体-粒子碰撞，会影响菌体的形态，影响细胞完整性和通透性等方面，最终影响代谢产物的合成，并且，添加微粒比较的安全。

在本发明的一种实施方式中，所述活性物质为Antrodin C或Antroquinonol。

在本发明的一种实施方式中，所述微粒的粒径为2-38μm。

在本发明的一种实施方式中，所述微粒的添加量为1-12g/L。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵培养基包括：葡萄糖20～120g/L、大豆水解液 20～80mL/L、玉米浆粉5～26g/L、硫酸镁0.5～1.5g/L，磷酸氢二钾0.5～1.5g/L。

在本发明的一种实施方式中，所述大豆水解液为质量分数为10-30％w/v的大豆，40～50℃水解3～5h后所制备得到的。

在本发明的一种实施方式中，发酵条件为100～180r/min，20～35℃培养7～21d，初始pH 3～8。