[发明专利]一种黑腹果蝇肿瘤侵袭模型的建立方法

权利要求书

1.一种黑腹果蝇肿瘤侵袭模型的建立方法，其特征在于：该方法为将收集好的雌性处女蝇和健康雄性果蝇按照杂交流程进行杂交，所述的杂交流程包括如下步骤：

（1）将UAS-Dorsal.H果蝇品系和Sp/Cyo;Sb/TM6B.Tb果蝇品系进行杂交，在后代中选取基因型为UAS-Dorsal.H/Sp;+/Sb雄性果蝇；同时将Sp/Cyo;Sb/TM6B.Tb果蝇品系和UAS-Ras^V12果蝇品系进行杂交，在后代中选取基因型为+/Cyo;UAS-Ras^V12/TM6B.Tb雌性果蝇；然后将获得的UAS-Dorsal.H/Sp;+/Sb雄性果蝇和+/Cyo;UAS-Ras^V12/TM6B.Tb雌性果蝇进行杂交，在后代中选取基因型为UAS-Dorsal.H/Cyo;UAS-Ras^V12/Sb雄性果蝇；将得到的UAS-Dorsal.H/Cyo;UAS-Ras^V12/Sb雄性果蝇和基因型为Sp;Sb/SM6B-TM6B.Tb品系的雌性果蝇进行杂交，在后代中选取基因型为UAS-Dorsal.H;UAS-Ras^V12/SM6B-TM6B.Tb的果蝇建成能够传代保存的果蝇品系；

（2）观察到GFP标记的眼部组织的肿瘤细胞已经迁移腹部神经节的果蝇品系，即为黑腹果蝇Dorsal.H;Ras^V12肿瘤迁徙模型。

2.根据权利要求1所述的黑腹果蝇肿瘤侵袭模型的建立方法，其特征在于：步骤（2）的详细过程为：将ey-Flp acty⁺GAL4 UAS-GFP果蝇品系和步骤（1）中最终获得的UAS-Dorsal.H;UAS-Ras^V12/SM6B-TM6B.Tb果蝇品系进行杂交，在后代中选取基因型为ey-Flp,GFP/UAS-Dorsal.H;UAS-Ras^V12/+的三龄幼虫，表型为头部复杂组织处有GFP、体型正常非短粗，解剖果蝇的两个大脑半球和腹部神经节后，能够观察到GFP标记的眼部组织的肿瘤细胞已经迁移果蝇的腹部神经节，即为黑腹果蝇Dorsal.H;Ras^V12肿瘤迁徙模型。

3.根据权利要求2所述的黑腹果蝇肿瘤侵袭模型的建立方法，其特征在于：将ey-Flpacty⁺GAL4 UAS-GFP果蝇品系和步骤（1）中最终获得的UAS-Dorsal.H;UAS-Ras^V12/SM6B-TM6B.Tb果蝇品系进行杂交时，杂交的亲本雌雄可互换。

4.根据权利要求1所述的黑腹果蝇肿瘤侵袭模型的建立方法，其特征在于：所述杂交的培养基的配方为：红糖13.5%，琼脂0.7%，玉米粉8.5%，酵母0.8%，丙酸0.4%。

5.根据权利要求1所述的黑腹果蝇肿瘤侵袭模型的建立方法，其特征在于：所述杂交的饲养条件为：于温度25℃，湿度50%-60%的条件下进行培养。

6.根据权利要求1所述的黑腹果蝇肿瘤侵袭模型的建立方法，其特征在于：所述雌性处女蝇的选取方法为：将原种瓶中的成虫全部清除，此后每隔8小时收集刚羽化的雌果蝇，放入培养瓶中备用，由于刚羽化的果蝇，其身体细长而幼嫩得几乎透明，从腹部的腹面透过几丁质的外壳，能够看到腹腔内的黑色消化道，因此，可观察到黑色消化道的雌性个体即为处女蝇。