[发明专利]同胚接种、同步增殖鸡新城疫和禽流感复合病毒的方法

说明书

本发明涉及一种同胚接种、同步增殖鸡新城疫和禽流感复合病毒的方法，包括采用浓度为2～5％犊牛血清乳汉液或浓度为0.5％乳汉液作为种毒稀释液，将所述鸡新城疫病毒的种毒稀释至10^‑4～10^‑5，将禽流感病毒的种毒稀释至10^‑4～10^‑5，得到两种病毒的种毒稀释液，还包括混合剂制备步骤、鸡胚接种步骤、孵育观察步骤、冷却步骤、鸡胚病毒液收获步骤，本发明同时含有鸡新城疫病毒和禽流感病毒，而且鸡新城疫病毒含量及禽流感病毒含量的EID₅₀均超过了制苗要求的标准，且鸡胚病毒液单胚平均收获量大，可直接使用，简化了生产工艺，提高了生产效率，降低了生产成本，方便了实际需求，同时也降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及一种兽用生物制品领域，尤其涉及一种鸡新城疫和禽流感复合病 毒的增殖方法。

背景技术

鸡新城疫和禽流感是家禽的主要传染病，被世界动物卫生组织列为必须报告 的动物疫病，我国将其规定为一类动物疫病，新城疫是由新城疫病毒(NDV)引 起的一种高度接触性传染病，禽流感是由A型流感病毒(AIV)引起的一种禽类 感染或疾病综合征。新城疫和高致病性禽流感(HPNAI)感染，鸡的死亡率高， 造成的经济损失很大，低致病性禽流感(LPNAI)则发病率高，造成产蛋率下降5～ 50％，无论是高致病性禽流感病毒还是低致病性禽流感病毒，都可以引起人的感 染或死亡，且低致病性禽流感H9亚型病毒在人群中的血清阳性率，明显高于其 他亚型的流感病毒。

目前，控制鸡新城疫和禽流感这两种疾病主要靠疫苗免疫，疫苗生产就必须 用到鸡新城疫病毒鸡胚液和禽流感病毒鸡胚液。单一病毒鸡胚液制备的灭活疫苗 只能用于一种疫病的预防，若要预防鸡新城疫、禽流感两种疫病，则需要将两种 单病毒疫苗分别免疫接种鸡群，这样劳动强度大、鸡群应激反应强、免疫成本高； 目前，普遍采用鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗免疫，达到了一次免疫同时预防 鸡新城疫和禽流感疫病的目的，但制苗用鸡胚病毒液是分别生产鸡新城疫鸡胚病 毒液和禽流感鸡胚病毒液，再将它们分别进行至少2倍的浓缩，之后按1：1体 积比混合得到，这种疫苗制备方法繁杂落后，成本较高，且浓缩环节可能还会造 成污染，降低疫苗质量，增大疫苗的副反应，甚至导致病毒液报废，生产成本进 一步升高，还会连带生产计划不能如期完成，影响免疫进度，制约畜牧业的发展。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的不足，提供一种同时含有足量达标的鸡新 城疫病毒和禽流感病毒，显著提高鸡胚病毒液单胚平均收获量的同胚接种、同步 增殖鸡新城疫和禽流感复合病毒的方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种同胚接种、同步增殖鸡新 城疫和禽流感复合病毒的方法，包括以下步骤：

1)种毒稀释步骤：所述的种毒为鸡新城疫病毒和禽流感病毒，采用浓度为2～ 5％犊牛血清乳汉液或浓度为0.5％乳汉液作为种毒稀释液，将所述鸡新城疫病毒的 种毒稀释至10^-4～10^-5，将禽流感病毒的种毒稀释至10^-4～10^-5，得到两种病毒的 种毒稀释液；

2)混合剂制备步骤：将鸡新城疫病毒的种毒稀释液和禽流感病毒的种毒稀释 液按体积比1:1混合，制得混合剂，备用；

3)鸡胚接种步骤：尿囊腔接种9～11日龄的鸡胚，0.1～0.2ml/胚，接种后 密封针孔；

4)孵育观察步骤：将接种后的鸡胚在温度为36～37.5℃、湿度为60～70％的 条件下继续孵育，不必翻蛋，弃去接种后60h前的死胚，此后，每6～8h照蛋1 次，死亡胚随时取出，孵育至96～120h，终止孵育观察；

5)冷却步骤：将接种孵育60h后的死胚及96～120h终止孵育观察的鸡胚， 气室向上直立，置2～8℃环境中冷却4～24h；