[发明专利]一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法

说明书

本发明公开了一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法，采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，往预先包被人白介素2可溶性受体捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并此地洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下被转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的sCD25呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度，可将测定时间缩短至120分钟。

技术领域

本发明属于生命科学和生物技术领域，特别一种用于人白介素2可溶性受体(sIL-2R_sCD25)ELISA检测方法。

背景技术

嗜血细胞综合征(HPS)，是一种免疫介导的危及生命的疾病。可以影响各个年龄人群，不仅发生在先天性遗传易感性免疫缺陷患者，也越来越多的发生在自身免疫性疾病，持续性感染、恶性肿瘤或免疫抑制的患者中发生。主要由淋巴细胞单核细胞和巨噬细胞系统异常激活、增殖，分泌大量炎性细胞因子而引起的一系列炎症反应。临床以持续发热、肝脾肿大、全血细胞减少以及骨髓、肝、脾、淋巴结组织发现嗜血现象为主要特征。

根据嗜血细胞综合征中国专家联盟，中华医学会儿科学分会发表的《嗜血细胞综合征诊治中国专家共识》诊断标准中，分子诊断该病相关的8个基因发生病理性突变，或者临床中8条中符合5条即可诊断。其中临床8条的诊断标准中，明确提出sCD25即可溶性白鞋吧介素-2受体升高，是为其中的一条诊断标准。关于sCD25的水平，根据国内协作组研究结果和梅奥医学中心的结果推荐，sCD25水平≥6400pg/ml可作为诊断标准之一。

传统夹心ELISA利用的是一对能够结合于靶蛋白上至少两个不同位点的抗体。捕获抗体预包被于微孔板的微孔表面，并与靶蛋白选择性结合。清洗后，加入检测抗体，连接到靶蛋白的第二位点，形成夹心复合物。传统检测方法时间长，操作复杂。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明提供了一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法，采用单步清洗方案，同时将待测品、标记HRP的抗体一起孵育，孵育后，只清洗板一次，可将测定时间缩短至120分钟。

一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将人白介素2可溶性受体捕获抗体包被于微孔中；

(2)加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，温育后洗涤；

(3)加入底物TMB显色；

(4)用酶标仪在450nm处测吸光值。

本发明采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，往预先包被人白介素2可溶性受体捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并此地洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下被转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的sCD25呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

进一步地，上述检测方法的具体步骤如下：

(1)将人白介素2可溶性受体捕获抗体包被于微孔中；

(2)设置标准孔(S1-S6)、空白孔(B)和样本孔(1-14)；在标准孔中各加入标准品50ul，空白孔不加

(3)样本孔中加入待测品10ul，再加入样本稀释液40ul；

(4)标准品孔和样本孔中加入抗体-HRP 50ul，贴好封板膜，37℃温浴60min；

(5)弃去液体，拍干，每孔加满稀释好的洗涤液，静置1min，拍干；重复洗板5次；

(6)所有孔加入底物TMB50ul，37℃温浴60min；