[发明专利]基于circ-Atp5BP调控卵巢颗粒细胞的方法

说明书

本发明提供了一种基于circ‑Atp5BP调控卵巢颗粒细胞的方法，该方法包括如下步骤：(1)对巢颗粒细胞进行接种和传代培养；(2)待细胞密度培养到35～45％时，将circ‑Atp5BP基因或pik3基因转染至巢颗粒细胞中。本发明首次证明circ‑Atp5BP及pik3在猪卵巢颗粒细胞增值调控中的应用，以及circ‑Atp5BP与pi3k靶向调控关系。本发明可以显著的调控卵巢颗粒细胞的增值。

技术领域

本发明属于细胞工程以及基因工程技术领域，具体涉及一种基于circ-Atp5BP调控卵巢颗粒细胞的方法。

背景技术

卵巢是决定雌性动物繁殖力的重要器官，它的主要功能之一就是卵泡发育和排卵。卵巢功能异常会导致生殖降低，这些功能异常情况包括卵巢早衰(Premature ovarianfailure，POF)、多囊卵巢综合症(polycystic ovarian syndrome，PCOS)以及卵巢癌症等。其中卵巢早衰的主要原因：一是在胚胎时期没有形成足够多的原始卵泡(先天不足)；二是原始卵泡的激活和抑制受到影响，也有研究显示卵泡闭锁的加速也能引发卵巢早衰。

在卵泡的发育过程中，颗粒细胞会由扁平状变成立方形进而分化，这一系列的变化都会对卵母细胞的成长发育、原始卵泡生长的启动、生长期卵泡发育的调控以及卵泡闭锁有着重要的作用。此外颗粒细胞凋亡也是启动卵泡闭锁的重要机制。

在生猪生产中仔猪的出生率与生产的经济效益显著正相关，如何提高产子数在现代猪遗传育种工作中都扮演至关重要的角色。目前对于提高母猪产子数主要依赖遗传辅助标记选择，对于标志基因纯合或杂合个体的筛选以及与产子性能较好的猪种如太湖猪等杂交育种，除此之外暂无极为显著的提高方法。然而，母猪的产子数还与卵泡的发育相关，卵巢颗粒细胞直接影响卵泡的发育，因此探究影响卵巢颗粒细胞增殖的条件在生产实践中对于促进卵泡发育、排卵具有重要意义。

环状RNA是一类内源性的非编码RNA，最早发现于1971年。当时研究者发现了一类没有蛋白质外壳包被并且基因组是单链闭合状态的RNA分子可侵染马铃薯植株。1979年，Hsu和Coca-Prados通过电子显微镜观察到真核细胞细胞质中存在圆环形RNA。1993年，研究者发现小鼠精子决定基因Sry在转录过程中存在环状转录。但这些发现在当时并没有引起研究者的注意。直到2012年，借助于高通量测序技术，Salzman等研究发现无论是白血病细胞、Hela细胞系还是正常人原代血细胞均存在通过外显子重排形成非线性的环状转录物现象，约80个环状RNA被首次报道。自此，大量的circRNA分子被相继鉴定。目前对于环状RNA的命名相较于miRNA是较为混乱的，统一并且公认完善的命名规则亟待解决。除此之外，对于环状RNA的形成机制仍然存在争议，目前存在两种主流的环状RNA成环争议，分为套索驱动模型和内含子配对驱动模型。套索模型理论认为套索驱动模型认为pre-RNA在转录过程中由于RNA发生了部分折叠，拉近相邻的外显子，从而致使外显子跳跃，之后被跨越的区域由剪接供体(splice donor；SD)与剪接受体(splice acceptor；SA)结合形成了circRNA中间体，并进一步通过套索剪接形成由外显子构成的circRNA分子。该模型认为，任何的外显子跳跃都可以形成一个circRNA。然而，内含子配对驱动模型则认为，内含子区域的反向互补序列导致了内含子区域配对，使与内含子接壤的两个外显子相互靠近，进一步反向剪接形成circRNA分子。

目前，大量研究表明相较于lncRNA，环状RNA具有更好地稳定性、保守性，并且通过测序等数据的计算不难发现circRNA具有组织特异性以及时空特异性。并且circRNA的功能与其在细胞的位置紧密相关，不难推测环状RNA在众多生物学过程中也扮演了重要角色。

发明内容

针对现有技术的不足和需求，本发明的目的在于提供一种一种基于circ-Atp5BP调控卵巢颗粒细胞的方法，该方法能显著的调控卵巢颗粒细胞的增值。

为了实现上述目的，本发明提供的方案如下：