[发明专利]一种蛋白酶荧光分光光度快速检测方法

说明书

本发明提供了一种蛋白酶荧光分光光度快速检测方法，通过将待测样品中的蛋白酶通过激发酪蛋白间接的产生荧光的方式，进行蛋白酶指标的检测和结果的分析，既解决了常规检测反应现象不直观的问题，又提高了传统检测方法分析结果滞后的问题。与传统方法相比，本发明开发出了更便捷快速的检测方法，为多样性蛋白酶检测方法的开发提供途径，按照方法中能够激发酪蛋白的不同的蛋白酶标准品，可以根据产品中特异性蛋白酶的特性进行深入的分析，让分析方向更有针对性。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种蛋白酶荧光分光光度快速检测方法。

背景技术

UHT(超高温杀菌技术)产品是一款长货架期产品，其持续的稳定性是直接影响产品货架期的因素之一。为了保证产品的长保质期，传统方法采用对不同货架期产品进行定期开包形式的稳定性指标监控，以关注产品的稳定性，这种监控方式检验持续周期长，不利于问题的分析处理。

已引入的福林酚蛋白酶检测方法，则是通过间接的方式进行产品稳定性的监控，这种方法较传统监控有了较大的改进。但由于关键性试剂的纯度不能满足实验要求，导致要求的吸光常数K值不能满足规定(95％-105％)的范围，结果的准确性受到不可规避的影响。

即目前用于间接监控货架期产品的监测方法，由于以上原因，不能很好的辅助于常规货架期的监测。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白酶荧光分光光度快速检测方法，该方法能够提高检测的便捷性和精准度。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明涉及一种蛋白酶荧光分光光度快速检测方法，包括以下步骤：

(1)将孵育缓冲液、FITC酪蛋白基质和待测样品混合后，得到第一混合液；

(2)对所述第一混合液进行离心处理，得到上清液和沉淀物；

(3)向所述上清液中加入TCA溶液后，得到第二混合液；

(4)将所述第二混合液与分析缓冲液混合后，得到第三混合液；

(5)将所述第三混合液置于荧光分光光度计中，记录在波长为485nm的激发光下的荧光强度，并监测波长为535nm的发射波强度；

(6)将所述发射波强度与标准曲线进行对照，得到待测样品中酪蛋白的浓度。

进一步地，步骤(1)中，选用20μl孵育缓冲液、20μl FITC酪蛋白基质和10μl待测样品。

进一步地，步骤(1)中，所述待测样品中含有浓度为0-2.5μg/ml的酪蛋白。

进一步地，步骤(1)中，所述孵育缓冲液中，含有浓度为20mmol/L的磷酸二氢钠和浓度为150mmol/L的氯化钠；所述FITC酪蛋白基质为FITC-荧光素标记酪蛋白，是市售产品；

进一步地，步骤(2)中，所述离心处理的转速为10000r/min，时间为10min。

进一步地，步骤(3)中，所述TCA(三氯乙酸)溶液的加入量为150μl，TCA浓度为6.1N(N为当量浓度，含义为1升溶液中所含溶质的克当量数)。

进一步地，步骤(4)中，所述分析缓冲液中，含有浓度为500mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用盐酸将pH值调至8.5。

进一步地，步骤(4)中，将2μl第二混合液与200μl分析缓冲液混合后移入黑色96孔板的孔中，得到第三混合液；或

将30μl第二混合液与3μl分析缓冲液混合后移入试管中，得到第三混合液；