[发明专利]一种用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基、诱导橡胶树体细胞胚发生的方法和应用

说明书

本发明提供了一种用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基、诱导橡胶树体细胞胚发生的方法和应用，属于植物组织培养技术领域。本发明提供的用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基，以MS培养基为基本培养基，通过调整MS培养基中原有各组分的浓度以及添加生物素、叶酸、天冬酰胺、水解酪蛋白、蔗糖、Phytagel、椰子水和激素组合物等组分，显著提高了橡胶树体细胞胚的发生效率，为橡胶树体胚苗的研发和应用奠定了技术基础。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基、诱导橡胶树体细胞胚发生的方法和应用。

背景技术

天然橡胶是一种重要的工业原料和战略物资，其主要来源于橡胶树。目前生产上应用的主体种植材料为芽接苗，即实生苗嫁接优良品种接穗所培育的种苗。因砧木来源于自然授粉的种子，遗传来源不一致，导致植株间产量、生长存在显著差异。体胚苗是由体细胞胚直接发育而来的，具有自我根系的幼态化无性系，较目前生产上应用的种苗-芽接树，产量高10％～30％，生长快10％～20％，是天然橡胶产业新一代种植材料。但是，目前仍有许多品种的花药体细胞胚难以诱导，部分能诱导的品种体细胞胚发生率也偏低，只有个别品种体细胞胚发生率达到30％，严重制约了橡胶树体胚苗的研发和应用。因此，迫切需要提供一种提高橡胶树体细胞胚发生的方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基、诱导橡胶树体细胞胚发生的方法和应用。本发明提供的用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基可显著提高橡胶树的花药体细胞胚发生效率，为橡胶树体胚苗的研发和应用奠定了技术基础。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基，包括胚性愈伤组织诱导培养基；

所述胚性愈伤组织诱导培养基以MS培养基为基本培养基，调整硝酸铵的浓度为330～1800mg/L，五水硫酸铜浓度为0.1～0.3mg/L，烟酸浓度为2.5～7.5mg/L，VB 1浓度为0.25～0.75mg/L，添加生物素0.01～0.1mg/L，叶酸0.1～1mg/L，天冬酰胺100～600mg/L，水解酪蛋白100～600mg/L，蔗糖50～90g/L，Phytagel 2～3g/L，椰子水40～90ml/L和激素组合物，以胚性愈伤组织诱导培养基的体积计，所述激素组合物包括以下质量浓度的组分：2,4-D 0.2～2mg/L、Zeatin 0.2～2mg/L和Picloram 0.2～2mg/L；或者包括2,4-D 0.2～2mg/L、KT 0.2～2mg/L和Picloram 0.2～2mg/L。

本发明提供了一种基于上述技术方案中所述胚性愈伤组织诱导培养基的诱导橡胶树体细胞胚发生的方法，包括如下步骤：摘取绿色至黄色、完全未开放的雄花并消毒；从消毒后的雄花中将雄蕊剥出并接种到胚性愈伤组织诱导培养基进行诱导培养，得到胚性愈伤组织；将胚性愈伤组织转接到体细胞胚分化培养基，进行分化培养，得到体细胞胚。

优选的，所述消毒的方法包括如下步骤：将所述雄花用体积百分含量为70％～75％酒精水溶液表面消毒30～60s；酒精水溶液表面消毒后，用质量百分含量为0.1％氯化汞水溶液消毒10～15min；氯化汞水溶液消毒后，用无菌水冲洗。

优选的，所述诱导培养的条件为：温度26～28℃，相对湿度65％～75％，黑暗条件下培养40～60d。

优选的，所述分化培养的条件为：温度24～26℃，相对湿度65％～75％，黑暗条件下培养40～60d。

本发明提供了上述技术方案中所述的用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基或上述技术方案中所述的方法在橡胶树体胚苗培养中的应用。

本发明提供了上述技术方案中所述的用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基或上述技术方案中所述的方法在提高橡胶树体细胞胚发生率中的应用。