[发明专利]一种新型MTT细胞活力检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种MTT检测试剂盒及其应用，所述MTT检测试剂盒包括试剂一和试剂二；所述试剂一包括以下终浓度的组分：MTT 5‑10mg/ml，分散酶II0.5‑1.5U/mL，纤维素酶0.05‑0.2mg/mL，溶剂为PBS；所述试剂二包括以下终浓度的组分：SDS 0.05‑0.5g/ml，异丁醇2‑10vt％，HCl 0.02‑0.2mol/l，溶剂为无菌水。该试剂盒应用在类器官药敏活力检测中。本发明在类器官药敏实验上不需要用DMSO溶解和去除上清，操作难度更小，安全性更高，并且准确性和重复性方面优于一般的MTT药敏检测方法。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种MTT检测试剂盒及其应用。

背景技术

MTT法是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞中的琥珀酸脱氢酶与MTT进行反应生成结晶紫甲瓒，用DMSO溶解后可在一定波长下进行检测，从而间接反映活细胞数量。该方法已广泛用于大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

一般的MTT检测试剂盒利用DMSO溶解甲瓒，DMSO不仅对人体有害，而且在低温条件下DMSO易结冰，从而会影响甲瓒的溶解进而影响检测结果；且溶解甲瓒需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，也会导致结果不稳定；最重要的是一般的MTT检测试剂盒无法充分将类器官中的琥珀酸脱氢酶释放出来，会造成结果不准确，重复性差等问题。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提供一种MTT检测试剂盒及其应用以解决上述问题。本发明的技术方案为：

第一个方面，本发明提供一种MTT检测试剂盒，包括试剂一和试剂二；所述试剂一包括以下终浓度的组分：MTT 5-10mg/ml，分散酶II 0.5-1.5U/mL，纤维素酶0.05-0.2mg/mL，溶剂为PBS；所述试剂二包括以下终浓度的组分：SDS0.05-0.5g/ml，异丁醇2-10vt％，HCl 0.02-0.2mol/l，溶剂为无菌水。

进一步地，所述试剂一的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将分散酶II、MTT粉末、纤维素酶溶于PBS中，0.22μm滤膜过滤，于-20℃避光保存。

进一步地，所述试剂二的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将SDS、异丁醇、盐酸、无菌水混合均匀至得到溶液，室温保存。

第二个方面，本发明提供上述MTT检测试剂盒在类器官药敏活力检测中的应用。

第三个方面，本发明提供一种类器官药敏活力检测方法，包括：

(1)接种48h后将类器官培养板取出，加入待测药物后，于5％CO₂、37℃继续培养72-96h；

(2)在类器官培养板中加入试剂一继续培养2-4h；

(3)在孔板中加入试剂二继续培养4～6h，于570nm进行药敏活力检测。

本发明提供了一种新的MTT检测试剂盒及药敏检测方法，与传统MTT检测方法相比，具有以下几个优点：。

1、本方法可以不需要用DMSO溶解和去除上清，操作难度更小，安全性更高。

2、本方法不受温度限制，甲瓒的溶解效果优于一般的MTT药敏检测方法，更适用于类器官的药敏活力检测。

3、本方法在药敏实验的准确性和重复性方面优于一般的MTT药敏检测方法。

附图说明

图1为本发明实施例6的人肺癌类器官细胞活力随恩曲替尼药物浓度变化的曲线图。

图2为本发明实施例7的人肠癌类器官细胞活力随瑞戈非尼药物浓度变化的曲线图。

图3为本发明实施例8的人乳腺癌类器官细胞活力随依维莫司药物浓度变化的曲线图。