[发明专利]一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法

权利要求书

1.一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：筛选适合于海水稻长毛谷成熟胚组织培养的基本成分；

步骤2：愈伤组织诱导培养；

步骤3：愈伤组织继代培养；

步骤4：愈伤组织诱导分化培养；

步骤5：幼苗诱导生根培养；

步骤6：苗的锻炼和移栽：苗至瓶盖顶部，就要及时开盖，加入适量无菌水，炼苗2-5天，然后洗去琼脂，移栽木村B营养液中，培养一个星期，然后移到土中继续培养。

2.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导培养包括以下步骤：

步骤1：将籼稻成熟种子去壳后，先用3％Ca(OCl)2消毒2.5小时；

步骤2：用无菌水冲洗3遍，然后加入适量的无菌水，放在4℃冰箱过夜；

步骤3：第二天再用3%Ca(OCl)2消毒1小时，无菌水冲洗三遍，放在灭菌过的滤纸上吹干表面水分；

步骤4：将消毒的籼稻成熟胚接入到愈伤组织诱导培养基中，在30 ℃的暗环境下培养3-4周左右，诱导愈伤组织。

3.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述愈伤组织继代培养包括以下步骤：

步骤1：将诱导出来的愈伤组织，挑取淡黄色、致密呈球状自然分裂的胚性愈伤组织，接种到继代培养基中；

步骤2：将继代培养基放在30℃暗环境下培养，继代培养周期为10-15天或可转移至暗处30℃继续培养1周。

4.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导分化培养包括以下步骤：

步骤1：挑取颜色鲜黄的愈伤组织3-5颗移入分化培养基平板上；

步骤2：将分化培养基平板放在4.5 klux、30℃培养，待分化成苗（4-5周）。

5.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述幼苗诱导生根培养包括以下步骤：

步骤1：筛选苗长至2-5厘米的幼苗，用剪刀从苗基部剪去老根和愈伤组织；

步骤2：放入装有生根培养基的带盖广口瓶中壮苗，培养1周。

6.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述适合于海水稻长毛谷成熟胚组织培养的基本成分包括：

N6大量元素：KNO3：2.830g/L；KH2PO4：0.400g/L；MgSO4·7H2O：0.185g/L；CaCl2·2H2O：0.166g/L；(NH4)2SO4：0.463g/L；

B5微量元素：KI：0.75mg/L；H3BO3：3mg/L；MnSO4·4H2O：10mg/L；ZnSO4·7H2O：2mg/ L；Na2MoO4·2H2O：0.25mg/L；CoCl2·6H2O：0.025mg/L；CuSO4·5H2O：0.025mg/L。

7.根据权利要求2所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述诱导培养基的配方为：

在N6大量元素和B5微量元素基础上，添加2，4-D3 mg/L；L-proline：2.878g/L；L-谷氨酸：0.5g/L；肌醇：0.1g/L；水解酪蛋白：0.3g/L；蔗糖：30g/L；Phytagel：5g/L，pH值为5.8。

8.根据权利要求3所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述继代培养基配方为：

在N6大量元素和B5微量元素基础上，添加2 ，4-D：3mg/L；L-proline：2.878g/L；L-谷氨酸：0.5g/L；肌醇：0.1g/L；水解酪蛋白：0.3g/L；蔗糖：30g/L；Phytagel：5g/L，pH值为5.8。