[发明专利]一种用于灭菌效果监测的生物指示剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于芽孢萌发生长的培养基和用该培养基制备的生物指示剂及他们相应的制备方法。本发明通过特定的培养基，使芽孢萌发产酸时间更快，生物指示剂阅读器检测的响应值更高，响应时间更短，总体上使芽孢萌发检测结果较目前市场成熟生物制剂更快，更准确，具备推广应用价值。

技术领域

本发明具体涉及一种用于灭菌效果监测的生物指示剂及其制备方法。

背景技术

灭菌是指采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等，灭菌的彻底程度受微生物对灭菌方式的抵抗力、灭菌时间与灭菌方式强度的制约。由于灭菌是获得纯培养的必要条件，现在很多行业领域，如食品工业、医药领域、农业种植都会使用到灭菌技术，灭菌的效果直接关系到行业的质量安全，生产效益。

生物指示剂是一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能，灭菌程序的验证，生产过程灭菌效果的监控等。目前普遍使用的生物指示剂存在检测时间长，降低了涉及灭菌工艺的行业工作效率。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种用于芽孢萌发生长的培养基，它是由如下重量百分比的原料制备而成：

胰酪蛋白胨0.5～1.5％，脑心浸出液肉汤0.5～1.5％，果糖0.2～0.4％，葡萄糖0.1～0.3％，氯化钾0.05～0.15％，磷酸盐0.05～0.15％，吐温80 0.05～0.2％，丙氨酸0.3～0.7％，赖氨酸0.05～0.15％，缬氨酸0.05～0.15％，2,6-吡啶二羧酸0.17～0.25％，CaCl₂0.10～0.18％，氯化锰0.0005-0.0015％，4-甲基伞形酮酰-α-D-吡喃葡糖苷(4-MUG)0.01～0.03％，溴甲粉紫0.001～0.003％，其余为pH 7.4-7.8水溶液。

进一步地，它是由如下重量百分比的原料制备而成：

胰酪蛋白胨1％，脑心浸出液肉汤培养基1％，果糖0.3％，葡萄糖0.2％，氯化钾0.1％，磷酸盐0.1％，吐温80 0.1％，丙氨酸0.5％，赖氨酸0.1％，缬氨酸0.1％，2,6-吡啶二羧酸0.21％，CaCl₂0.14％，氯化锰0.001％，4-甲基伞形酮酰-α-D-吡喃葡糖苷(4-MUG)0.02％，溴甲粉紫0.002％，其余为pH 7.4-7.8水溶液。

更进一步地，所述磷酸盐为磷酸氢二钾；所述丙氨酸为L-丙氨酸；所述赖氨酸为L-赖氨酸；所述缬氨酸为L-缬氨酸。

本发明还提供了一种生物指示剂，它包括芽孢和前述培养基；所述培养基与芽孢的体积菌落数配比为0.7mL：1×10⁵～1×10⁶CFU。

进一步地，所述培养基与芽孢的体积菌落数配比为0.7mL：1×10⁶CFU。

更进一步地，所述芽孢为嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus的休眠体。

更进一步地，所述芽孢附着在载体上；所述载体为纸片，规格为0.5～1×1～3cm。

更进一步地，所述纸片为特卫强纸，其规格为0.5×2cm。

本发明还提供了一种前述培养基的制备方法，它包括如下步骤：

(1)按配比称取原料；

(2)取4-MUG，用二甲亚砜溶解得4-MUG溶液；取L-丙氨酸、L-赖氨酸、L-缬氨酸，加配方量5％的水溶解，得氨基酸溶液；取剩余原料，加配方量95％的水溶解，调节pH值至7.4-7.8，灭菌，得培养基母液；

(3)将步骤2)氨基酸溶液与4-MUG溶液，混合，过滤除菌，再与步骤2)培养基母液混合，即得培养基。