[发明专利]猪源抗菌肽PMAP-23变体及其在制备饲料中应用

说明书

本发明在猪源抗菌肽PMAP‑23通过对其肽段进行改造，提高了抗菌肽的抑菌活性和安全性，且具有改善的热稳定性，进一步将其制备成为饲料添加剂，可以用于仔猪等动物的饲喂，用于改善动物的生长性能，降低料肉比，提高养殖的经济效益，并且作为天然抗菌肽的变体，其不会给饲喂动物带来耐药性，具有积极的社会意义。

技术领域;

本发明属于生物技术领域，涉及猪源抗菌肽PMAP-23变体及其在应用，具体涉及猪源抗菌肽PMAP-23及其在制备饲料中应用。

背景技术：

抗生素是治疗和预防动物感染性疾病的首选药物，其在动物生产中已经有60-70年的使用历史，能够起到预防和治疗有害细菌导致的疾病，对于动物生长具有一定的促进作用，层对畜禽和水产养殖业的发展起到了巨大的推动作用。然而，随着抗生素在畜牧养殖行业广泛使用，一些问题逐渐显现，如兽药残留和环境中抗生素污染可对人体产生直接毒性及过敏作用，再例如，多药耐药菌迅速蔓延，甚至不断出现“超级细菌”，导致临床疾病难以治疗，对全球健康构成威胁。鉴于此，欧盟等发达国家开始禁止在畜禽饲料中使用抗生素，我国也于2020 年1 月1 日开始在饲料中禁止使用抗生素，因此，寻找替代抗生素已经成为预防和治疗耐药菌感染的首要任务，特别是对饲料加工和养殖行业的发展具有重要的意义。

在现有研究中，有研究采用金属离子、中草药提取物、益生菌制剂、有机酸和抗菌肽等替代抗生素，其中抗菌肽是替代抗生素的首选成分之一。抗菌肽通常是指具有抗菌作用的小分子活性多肽，存在于从细菌到植物、脊椎动物和无脊椎动物的所有生命形式中，是宿主黏膜表面防御的一类重要分子，对细菌、真菌、病毒等微生物与寄生虫有抑杀活性，是固有免疫防御的普遍组成部分。抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性好、毒性小等特点，且其主要是通过物理渗透作用作用于细菌胞膜或其他广义靶点而产生抑菌和杀菌作用，而细菌等微生物难以改变其自身的胞膜结构，因而，抗菌肽使得细菌通过基因突变获得耐药性的可能性变得很小。目前，已经筛选和得到上千种抗菌肽，例如，猪源抗菌肽是从猪的组织和器官中分离得到的具有抗菌活性为小肽，目前已经发现11中猪源抗菌肽，这11中猪源抗菌肽包括PR39、PF-1、PF-2、PG-1、PG-2、PG-3、PG-4、PG-5、PMAP-23、PMAP-36和 PMAP-37。

然而，真正用于饲料领域的抗菌肽却很少，因为天然来源的抗菌肽部分会因为分子量较大而具有一定的免疫原性，对宿主细胞具有细胞毒性，例如对红细胞等产生溶血作用；并且天然抗菌肽通常产量小，分离难度高，成本也较高，近几年来，科学家们开始致力于对天然抗菌肽进行人工改造或设计，可以解决内源性抗菌肽产量小、分离难度高的问题，可以获得活性更高、更有针对性同时对宿主无毒害作用的抗菌肽。

发明内容：

为了解决现有技术中抗菌肽使用中存在的问题，本发明以天然猪源抗菌肽PMAP-23为基础，经人工设计和改造，得到猪源抗菌肽PMAP-23变体，其相比原始的猪源抗菌肽PMAP-23提高了生物活性和安全性，表现出对金黄色葡萄球菌、致病性大肠杆菌和沙门氏菌具有更好的抑菌活性，而在溶血活性方面，溶血率略有降低，且本发明改造后的猪源抗菌肽PMAP-23具有更好的酸碱稳定性和热稳定性，将其与常规的饲料载体组合后制备的饲料添加剂能够有效地抑制肠道中有害微生物的生长，改善饲喂动物的生长性能，对于饲料产业的发展具有重要的意义。

为解决以上技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种猪源抗菌肽PMAP-23变体，其特征在于，所述抗菌肽的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。

其中SEQ ID NO：1的氨基酸序列为：N-RIIDLKWRVRRPQKPKFVTCWVRR-C。

本发明还请求保护所述抗菌肽在制备动物饲料添加中的应用，所述抗菌肽可以改善动物的生长性能。

优选的，所述动物饲料添加剂为猪、鸡或鸭的饲料添加剂。

优选的，所述猪为仔猪，所述鸡为雏鸡，所述鸭为雏鸭。