[发明专利]一种高稳定性的灭活型病毒保存液及其制备方法

说明书

本发明提供了一种高稳定性的灭活型病毒保存液及其制备方法，所述保存液包括裂解盐、Rnase酶抑制剂、氨基丁三醇、乙二胺四乙酸、甘油、核酸保护肽、水，所述Rnase酶抑制剂中包括异硫氰酸胍、苯酚、柠檬酸钠、二硫苏糖醇和月桂酰肌氨酸钠，所述Rnase酶抑制剂中各成分的重量配比为：16份异硫氰酸胍、2份苯酚、10份柠檬酸钠、1份二硫苏糖醇、1份月桂酰肌氨酸钠，所述保护液按如下重量份配比构成：包括裂解盐9份、Rnase酶抑制剂20份、氨基丁三醇14份、乙二胺四乙酸3份、甘油10份、核酸保护肽6份、水100份。通过裂解盐裂解病毒蛋白使其失去活性，提高运输过程中的安全性，同时又利用Rnase酶抑制剂保护病毒核酸不被降解，提高保存的病毒核酸的提取效率。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，尤其涉及一种高稳定性的灭活型病毒保存液及其制备方法。

背景技术

病毒保存液使用与新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作，时采样管内浸没采样拭子病毒样本一种保护病毒的被检测物质的液体，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。

现在已经开发出了很多灭活病毒保存液，经过我们大量的检索与参考，发现现有的保存液有如公开号为KR1020100015613A，KR1020170095270A和KR1020100049506A所公开的保存液，包括以下组分：柠檬酸钠、蛋白酶K、浓硫酸、乙二胺四乙酸和硫酸铵，其中柠檬酸钠的终浓度为10mM~35mM，蛋白酶K的终浓度为50~800μg/ml，浓硫酸的终浓度为0.5%~5%，乙二胺四乙酸的终浓度为5mM~50mM，硫酸铵的终浓度为45%~80%。本发明保存液安全无毒、配制简单、使用方便；病毒进入保存液即可使病毒灭活，无须冷藏运输及灭活处理；能在室温下避免RNA降解，可多次冻融而不影响RNA提取的质量。但该保存液仍会对部分核酸进行破坏，病毒核酸的完整度仍有待提高。

发明内容

本发明的目的在于，针对所存在的不足，提出了一种高稳定性的灭活型病毒保存液及其制备方法。

为了克服现有技术的不足，本发明采用如下技术方案：

一种高稳定性的灭活型病毒保存液，其特征在于，包括裂解盐、Rnase酶抑制剂、氨基丁三醇、乙二胺四乙酸、甘油、核酸保护肽、水，所述Rnase酶抑制剂中包括异硫氰酸胍、苯酚、柠檬酸钠、二硫苏糖醇和月桂酰肌氨酸钠；

进一步的，所述Rnase酶抑制剂中各成分的重量配比为：16份异硫氰酸胍、2份苯酚、10份柠檬酸钠、1份二硫苏糖醇、1份月桂酰肌氨酸钠；

进一步的，所述保护液按如下重量份配比构成：包括裂解盐5-14份、Rnase酶抑制剂15-25份、氨基丁三醇12-16份、乙二胺四乙酸1-5份、甘油8-13份、核酸保护肽4-7份、水90-110份；

进一步的，所述保护液按如下重量份配比构成：包括裂解盐9份、Rnase酶抑制剂20份、氨基丁三醇14份、乙二胺四乙酸3份、甘油10份、核酸保护肽6份、水100份；

制备如上述一种灭活型病毒保存液的方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1、制备Rnase酶抑制剂：将对应分量的异硫氰酸胍晶体、苯酚晶体、柠檬酸钠晶体和二硫苏糖醇晶体加入到10ml水中，搅拌摇匀后在常温下静置15分钟，将对应分量的月桂酰肌氨酸钠液体与10ml水混合，充分搅拌摇匀后在常温下静置15分钟，将上述2份溶液混合在一起，并进行加热蒸发，当出现有晶体析出时停止加热，将所述混合溶液冷却至5℃并封闭保存；

步骤2、将对应分量的裂解盐、氨基丁三醇、乙二胺四乙酸、核酸保护肽和甘油加入到10ml水中，混合均匀后将所得的溶液PH值调整至4.3~5.5，再添加2ml的Rnase酶抑制剂至混合溶液中，用灭菌水进行定容、用滤膜过滤除菌后分装保存所述病毒保存液。

本发明所取得的有益效果是：通过在所述Rnase酶抑制剂中加入月桂酰肌氨酸钠并调整其他各组分的配比，提高了对病毒核酸的保护效率，确保了病毒核酸的完整度，提高了被保存病毒的研究效用。