[发明专利]一种新型的拉曼光谱检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，其特征在于，包括单克隆或多克隆抗体组、拉曼活性物质标记的二抗、拉曼表面增强剂、磷酸缓冲液和抗原修复液。

2.如权利要求1所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，其特征在于，所述单克隆或多克隆抗体组为兔抗人CD3抗体、兔抗人CK20抗体、兔抗人p53抗体、NapsinA抗体、鼠抗人CEA抗体、MUC-4抗体、p16抗体、CK10抗体、CK14抗体、CK17抗体和Bax抗体中的两种或多种组合，所述二抗为拉曼活性化合物标记的Polymer-酶标二抗。

3.如权利要求1所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，其特征在于，所述拉曼活性化合物为2,4-二硝基苯酚、氨基苯甲酸、赤藓红、生物素、地高辛、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素和氨基吖啶中的一种或多种组合。

4.如权利要求1所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，其特征在于，所述拉曼表面增强剂为金属纳米粒子和金属氧化物纳米粒子中的一种或多种组合。

5.如权利要求4所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，其特征在于，所述金属纳米粒子为银纳米粒子、金纳米粒子、铂纳米粒子、锂纳米粒子或铜纳米粒子中的一种或多种组合，粒径为100-200nm。

6.如权利要求1所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，其特征在于，所述金属氧化物纳米粒子为氧化钛纳米粒子、氧化铁纳米粒子、氧化银纳米粒子、氧化锂纳米粒子、氧化铜纳米粒子、氧化金纳米粒子中的一种或多种组合。

7.如权利要求1所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒，其特征在于，所述抗原修复液为EDTA缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。

8.如权利要求1所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，烤片、脱蜡和复水：将组织切片置于60-65℃的烘箱中60min；将经过烤片后的组织切片置于二甲苯中浸洗2次，每次10分钟，然后依次在无水乙醇、95％乙醇、85％乙醇中分别浸洗2次，每次5分钟；

S2，抗原修复：用抗原修复液对上述经过烤片、脱蜡和复水后的肿瘤细胞切片进行95-100℃水浴加热修复15-30min或2450MHZ/秒微波修复10-30min；

S3，一抗孵育：将肿瘤组织石蜡切片用内源性过氧化物酶阻断10min后，用磷酸缓冲液清洗，滴加100μl单克隆抗体在石蜡切片上，在37℃条件下孵育50-90min，然后用磷酸缓冲液清洗3-4次；

S4，二抗标记：按照拉曼活性化合物∶二抗的体积比为(5-7)∶(8-10)的比例，将拉曼活性化合物加入到二抗溶液中，在37℃条件下进行化学配位耦合反应，得到标记有拉曼活性化合物的二抗；

S5，二抗偶联：将拉曼表面增强剂分散于金属化合物和磷酸缓冲液中，得到金属纳米粒子溶液；经过二抗标记后的肿瘤组织切片放入金属纳米粒子溶液，得到金属-抗体复合物；

S6，二抗孵育：将经过一抗孵育的肿瘤细胞切片与100μl金属-抗体复合物混合，在37℃条件下孵育30-40min，然后用磷酸缓冲液清洗2-3次；

S7，封片，检测：载玻片用吹风机吹干，然后在载玻片上滴加中性树胶，盖上盖玻片，待干片后放入拉曼光谱分析仪进行检测。

9.如权利要求8所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S5所述的金属化合物为HAuCl₄、AgNO₃和CuCl₂中的一种。

10.如权利要求8所述的一种新型的拉曼光谱检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤S7所述共焦拉曼光谱仪检测，检测范围600-1800cm^-1，激发波长785mm，采样时间1-100s，激发光功率为1-100mw。