[发明专利]一种构建色素脱失模型的方法

说明书

本发明提供了一种快速构建、且更接近于人类白癜风的色素脱失模型的方法，属于色素脱失模型构建技术领域。本发明首次联合使用过氧化氢和对苯二酚(氢醌)用于构建色素脱失模型，对受试动物脱毛处理后使用过氧化氢溶液对脱毛部位进行处理，持续4‑10天，再使用对苯二酚溶液对脱毛部位进行处理，持续4‑10天。本发明通过联合用药的方法，成功造出一种白斑明显、模型持续时间长、造模时间短、操作简单，并且与人类白癜风特征相似的白癜风模型小鼠，可为白癜风基础研究和治疗提供一种动物模型，为筛选预防和/或治疗白癜风药物提供了基础。

技术领域

本发明属于色素脱失模型构建技术领域，尤其涉及一种构建色素脱失模型的方法。

背景技术

白癜风是由于表皮黑色素细胞缺失引起的一种慢性的色素脱失性皮肤病，体内黑色素细胞进行性地被破坏，临床表现为在皮肤和头发出现不同程度的边界明显、形状规则、清晰的乳白色无鳞斑块状色素沉着。白癜风涉及多种发病机制如氧化应激、遗传易感、自身免疫、环境影响等。其发病机制尚不明确，临床治愈困难。建立合适的白癜风动物模型是深入研究白癜风的发病机制和防治措施的关键。

黑色素的缺失，是引起白癜风的直接原因。酪氨酸酶是黑色素合成途径中的关键酶，酪氨酸酶活性增强能促进黑色素的合成，减少皮肤白斑产生。黑色素均来自具有相同前体酪氨酸的常见酪氨酸酶依赖性途径。必不可少的步骤是酪氨酸羟基化为多巴醌，也可以从中衍生出1-DOPA。因此，酪氨酸酶-酪氨酸是皮肤着色的重要环节。对苯二酚，与酪氨酸酶的底物酪氨酸结构相似，可以竞争性抑制酪氨酸酶的活性，影响黑色素的形成。

铜(Cu)和锌(Zn)的异常与白癜风的病因和发病机制有关。有研究报道，白癜风患者的血清铜和锌水平普遍降低(doi:10.1111/1346-8138.12392.)。

氧化应激易引起细胞损伤，目前已有许多证据支持白癜风患者存在氧化应激。进展期白癜风患者表皮中过氧化氢水平明显升高，伴有多种抗氧化酶表达及活性的降低；白癜风患者皮损区角质形成细胞和非皮损区黑色素细胞都存在ROS的聚集和细胞膜过氧化。氧化应激在白癜风患者黑色素细胞中升高，可能直接抑制WNT信号通路的激活。由于WNT信号通路对成黑色素细胞的分化很重要，这种受损的信号可能在治疗过程中抑制黑色素细胞的再生(doi:10.1038/jid.2015.372；doi:10.1038/jid.2015.372)。目前，还没有与WNT通路相关的色素缺失动物模型的报道。

关翠萍发明了一种以6-羟基多巴胺在构建色素脱失模型中的应用及方法(CN106540277A)，该模型通过氧化应激引起黑色素细胞的凋亡，可用于抗氧化白癜风药物的筛选；许爱娥通过monobenzone软膏和注射免疫佐剂制备了一款白癜风动物模型(CN103919798A)。另外，白癜风的模型还有其他几种方法，但均存在造模效果不显著、造模时间长、模型持续时间短、操作复杂以及与人类白癜风发病机制不匹配等问题。

过氧化氢和对苯二酚分别具有氧化性和抑制酪氨酸酶的作用，分别持续作用于小鼠皮肤会产生不同类型和不同程度的皮肤变化。基于此，我们将两种试剂联合使用用于诱导白癜风小鼠模型具有可行性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种构建色素脱失模型的方法，操作简单，缩短造模的时间，而且构建所得的模型白斑明显、模型持续时间长，造模效果显著，并且与人类白癜风发病机制如白癜风组织中WNT通路被抑制的特征更为契合，解决了在白癜风研究工作中缺乏合适动物模型的问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种构建色素脱失模型的方法，包括如下步骤：先用过氧化氢溶液对受试动物的脱毛部位处理4～10天，再用对苯二酚溶液处理脱毛部位4～10天。

优选的，所述过氧化氢溶液的质量体积分数为2％～15％。

优选的，所述对苯二酚溶液的质量体积分数为1％～10％。