[发明专利]多信号荧光探针的合成及其同时区分Cys、SO2

权利要求书

1.同时区分Cys、SO₂、GSH和Hcy的多信号荧光探针，其特征在于，所述的荧光探针的化学结构式如下所示：

2.如权利要求1所述的多信号荧光探针的合成，其特征在于，所述荧光探针的制备方法包括以下步骤：

步骤1.合成4-羟基-7-(吡咯烷-1-基)-2H-色烯-2-酮

a.将适量丙二酸二苯酯与3-(吡咯烷-1-基)苯酚加入无水甲苯中，100℃反应8-12小时，

b.待反应冷至室温后过滤，固体用乙醚洗涤后真空干燥，得到灰绿色固体；

步骤2.合成4-氯-2-氧代-7-(吡咯烷-1-基)-2H-亚甲基-3-甲醛

I.在氮气保护条件下，将适量干燥重蒸的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)缓慢加入等体积的三氯氧磷(POCl₃)中，在20-50℃搅拌30分钟，得红色溶液，

II.将4-羟基-7-(吡咯烷-1-基)-2H-色烯-2-酮溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，逐滴加入到步骤I的混合溶液中，混合物继续在氮气保护下60℃搅拌反应12小时，

III.将步骤II中的反应液倒入适量冰水中，用20％的NaOH溶液调节pH至5～6，产生大量沉淀，过滤，固体用适量去离子水洗涤3次，真空干燥，得4-氯-2-氧代-7-(吡咯烷-1-基)-2H-亚甲基-3-甲醛；

步骤3.合成4-(丁硫基)-2-氧代-7-(吡咯烷-1-基)-2H-亚甲基-3-甲醛

i.将4-氯-2-氧代-7-(吡咯烷-1-基)-2H-亚甲基-3-甲醛和正丁硫醇溶于二氯甲烷中，滴加适量三乙胺，室温搅拌反应，

ii.将步骤i中反应液柱层析纯化得4-(丁硫基)-2-氧代-7-(吡咯烷-1-基)-2H-亚甲基-3-甲醛；

步骤4.合成多信号荧光探针(E)-2-(苯并[d]噻唑-2-基)-3-(4-(丁硫基)-2-氧代-7-(吡咯烷-1-基)-2H-吡喃-3-基)丙烯腈

A.4-(丁硫基)-2-氧代-7-(吡咯烷-1-基)-2H-亚甲基-3-甲醛和相应的2-(苯并[d]噻唑-2-基)乙腈加入适量无水乙醇中，适量对甲苯磺酸，室温搅拌反应，

B.反应完毕后，过滤，将所得固体真空干燥，得权利要求1所述的多信号荧光探针。

3.如权利要求1所述的多信号荧光探针同时区分Cys、SO₂和GSH和Hcy的应用，其特征在于，所述的荧光探针能够制备在环境中定量检测Cys、SO₂、GSH和Hcy，在细胞内同时区分成像Cys、SO₂、GSH和Hcy的器件的应用。