[发明专利]牛β防御素5作为一种新型黏膜免疫佐剂的应用

说明书

本发明提供了牛β防御素5作为黏膜免疫佐剂在预防结核病中的应用。通过表达纯化重组蛋白牛β防御素5，联合聚肌胞(PolyI：C)和结核分枝杆菌蛋白亚单位疫苗AH，通过滴鼻方式对C57BL/6小鼠进行免疫，证实其促进蛋白亚单位疫苗AH免疫效果的作用。与聚肌胞和AH免疫相比，使用牛β防御素5可促进抗原AH特异性细胞免疫和体液免疫水平、促进亚单位疫苗AH的抗牛分枝杆菌感染的保护作用。

技术领域

本发明属于结核病防治领域和疫苗领域，具体地，本申请提供了包含牛β防御素5的黏膜免疫佐剂，其特别适用于结核亚单位疫苗。

背景技术

结核病由结核分枝杆菌复合群引起的慢性传染性疾病，结核分枝杆菌和牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis，简称M.bovis)为主要致病菌，由牛分枝杆菌引起的牛结核是一种重要的人畜共患病，危害养殖业发展和公共卫生安全。牛分枝杆菌可以突破种间屏障在其他哺乳动物与人中间进行传播，宿主范围广。目前的调查研究中显示我国牛结核病存在着易反复、全国散发的特点，并通过食物、接触等方式传播给人。卡介苗(BacillusCalmette-Guerin，BCG)是目前广泛用于预防结核病的疫苗，能预防儿童结核病，但对预防成人结核病或潜伏性感染结核存在较多的局限性。因此，迫切需要开发出安全有效的结核疫苗来控制结核病的发生和发展。亚单位疫苗具有在疫苗生产过程中的质量控制和安全性好等优势，且可应用于已接种BCG的人群。与传统的减毒疫苗或灭活疫苗相比，由于仅含蛋白成分的蛋白亚单位疫苗免疫原性较弱从而不能诱导足够的免疫保护，因此通常需在蛋白亚单位疫苗中添加佐剂以提升其免疫原性。

由于结核病的致病菌主要通过呼吸道感染并进行传播，呼吸道的黏膜成为抵御结核分枝杆菌的第一道防线。设计稳定高效的黏膜免疫结核疫苗是结核疫苗研究的方向之一。而选择合适的黏膜免疫佐剂是黏膜免疫疫苗研发成功的关键。聚肌胞(polyinsinic-polycytidylic acid,poly(I:C)，简称P)是一种人工合成的由聚肌苷酸和聚胞苷酸通过碱基配对形成的病毒双链RNA类似物，属于第一类佐剂。是一种TLR3激动剂，也是有效的I型干扰素诱导剂。呼吸道黏膜免疫聚肌胞可通过增强树突状细胞和T细功能来增强流感疫苗的免疫作用。防御素是一种天然的阳离子抗菌肽，具有抗菌和免疫调节作用。防御素可以参与先天免疫反应，以非特异性方式抵抗病原微生物感染，此外，防御素作为信号分子，可与获得性免疫系统联合作用对抗微生物感染，也可用于治疗肺部炎症性疾病。

发明内容

本课题组前期研究发现牛β防御素5(bovine neutrophilβ-defensin-5，简称B5)可促进BCG的免疫保护作用，具有免疫调节活性。本发明研究证实了B5具有明显增强结核分枝杆菌蛋白亚单位疫苗AH的免疫原性和抗感染保护性作用，可作为一种潜在的黏膜免疫佐剂。本发明提供了一种新的结核亚单位疫苗黏膜免疫佐剂，具体使其在制备预防结核疫苗中的应用。本发明通过B5联合聚肌胞和蛋白亚单位疫苗AH进行鼻腔免疫，然后用牛分枝杆菌建立小鼠感染模型证实其免疫活性。

一方面，本发明提供了一种黏膜免疫佐剂，其包含牛β防御素5。

进一步地，所述黏膜免疫佐剂还包含聚肌胞。

进一步地，本申请提供了一种结核亚单位疫苗，其中包含上述佐剂。

另一方面，本申请提供了牛β防御素5在制备黏膜免疫佐剂中的应用。

进一步地，所述黏膜免疫佐剂还包含聚肌胞。

进一步地，所述黏膜免疫佐剂为用于结核亚单位疫苗的黏膜免疫佐剂。

进一步地，所述结核亚单位疫苗为滴鼻施用疫苗。

进一步地，所述结核亚单位疫苗用于增强卡介苗的效果。

另一方面，本申请提供了牛β防御素5在提高结核亚单位疫苗免疫原性和保护性中的应用。