[发明专利]定量检测人血浆样本中抗病毒药物含量的方法

说明书

本发明涉及一种定量检测血浆样本中抗病毒药物含量的方法，所述方法包括如下步骤：(1)将待测血浆样本在50‑60℃条件下灭菌20‑40min；(2)将灭菌处理的待测血浆样本与含有内标的蛋白沉淀液混合，涡旋后离心，将上清液稀释得到待检测液；(3)采用高效液相色谱串联质谱系统对待检测液进行检测和分析。本发明通过一种简单的前处理方法，即可同时准确的检测出人血浆中拉米夫定、齐多夫定、依非韦伦、奈韦拉平、洛匹那韦、利托那韦、阿巴卡韦和替诺福韦的浓度，为临床诊断和治疗提供依据。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，主要涉及一种定量检测人血浆样本中抗病毒药物含量的方法。

背景技术

艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，从1981年美国发现首例艾滋病至今，全球约有7570万人感染艾滋病，约有3270万人死于与艾滋病有关的疾病，是威胁全人类的重大传染病。从1987年第一种抗病毒药物齐多夫定(AZT)问世，到现在国际上共有六大类30多种药物，包括核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白酶抑制剂(PI)、整合酶抑制剂(INSTI)、融合抑制剂(FI)及CCR5抑制剂等。目前针对艾滋病，高效抗反转录病毒治疗(HARRT)是唯一有效的治疗手段，通过2个NRTI和1个NNRTI或2个NRTI和1个PI联合用药，大大加强药物的抗病毒作用。但几乎所有的抗病毒药物都会引起相应的不良反应，用药过量会导致严重的不良反应，药量不足，持续的药物浓度过低会影响治疗效果，并且会诱使HIV(humanimmunodeficiency virus)产生耐药性。虽然目前对于药物的使用有对应的推荐用量，但病人的个体差异，包括年龄、体重、疾病状况和对于药物吸收和消除的差异，合并用药引起的药物间相互作用以及用药途径等，都会影响治疗效果。因此，对于每一个治疗对象体内的药物浓度进行监测和控制尤为重要。

目前在临床上应用最多的抗病毒药物浓度的检测方法是高效液相色谱法和液质联用法。高效液相色谱法检测灵敏度有限，前处理一般需要进行富集才可以达到检测灵敏度的需求，样本处理流程复杂且样本量要求高。液质联用法是将高效液相色谱仪与质谱仪联合起来的检测技术，样本中的分析物在液相系统进行分离，然后进入质谱系统，质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱信号。该技术的灵敏度高，准确度好，兼具色谱和质谱的双重分离效果，可以一次检测多种药物浓度。同时，引入同位素内标进行校准，可以大大降低基质效应，检测准确度高。但由于技术的限制，目前存在的液质联用方法大多只能检测一种药物浓度。

公开号为CN109900819A的专利公开了一种UPLC/MS-MS联用检测人血清中替诺福韦的方法。该方法的前处理过程主要是将人血清样本进行蛋白沉降，离心后取上清进入液质联用仪进行分析。但是该方法只能检测一种药物浓度，临床应用范围有限。

公开号为CN110715990A的专利公开了一种同时检测血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的方法。该方法的前处理过程主要是将血浆样本进行蛋白沉降，离心后取上清进行稀释，然后进入液质联用仪进行分析。但是该方法每次也只能检测三种药物浓度，无法同时适用于不同的联合用药方案。