[发明专利]一种洛匹那韦中间体的酶催化合成方法

说明书

本发明涉及生物制药技术领域，尤其是一种洛匹那韦中间体酶催化合成方法，包括以下步骤：1)化合物Ⅳ与三氟乙酸在溶剂中反应，制得化合物Ⅲ；然后向反应瓶中加入碳酸氢钠、水、溶剂和化合物Ⅲ，开启搅拌，降温至‑5～5℃左右，向反应瓶内加入溴化钾和Tempo，滴加次10％氯酸钠溶液，TLC监控反应体系；反应完全后，加入硫代硫酸钠溶液，搅拌，水层用溶剂萃取，合并有机层，浓缩至干，重结晶，析晶后抽滤，干燥，得到化合物II；2)以化合物II为底物，在酮羰基还原酶、辅酶、酶循环氢供体、辅酶循环酶、助溶剂和缓冲液的存在下，进行生物催化反应生成洛匹那韦中间体，即化合物I。本发明的合成方法反应条件温和，对环境友好，实现了手性中间体的绿色合成。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体领域为一种洛匹那韦中间体的酶催化合成方法。

背景技术

洛匹那韦(Lopinavir)是一种HIV蛋白酶抑制剂，原研公司为雅培公司，其化学名称为(2S)-N-[(2R,4S,5S)-5-{[2-(2,6-二甲基苯氧基)乙酰]氨基}-4-羟基-1,6-二苯基-己-2- 基]-3-甲基-2-(2-氧代-1,3-二氮杂环己-1-基)丁酰胺，CAS号为192725-17-0。

洛匹那韦(结构式如下式所示)含有4个S-构型的手性碳，常规的洛匹那韦的手性碳的来源为L-苯丙氨酸、L-缬氨酸以及苯丙氨酸片段的手性辅助功能诱导产生，再经过化学拆分后去除非对映异构体。由于手性碳数量多，导致杂质数量较多，进一步导致工业化生产中质量控制的难度加大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种洛匹那韦中间体的酶催化合成方法，利用酶催化方法进行不对称还原反应制备洛匹那韦中间体。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种洛匹那韦中间体的酶催化合成方法，包括以下步骤：

(1)化合物Ⅳ与三氟乙酸在溶剂中反应，制得化合物Ⅲ；

然后向反应瓶中加入碳酸氢钠、水、溶剂和化合物Ⅲ，开启搅拌，降温至-5～5℃左右，向反应瓶内加入溴化钾和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(Tempo)，滴加次10％氯酸钠溶液， TLC监控反应体系；反应完全后，加入硫代硫酸钠溶液，搅拌，水层用溶剂萃取，合并有机层，浓缩至干，重结晶，析晶后抽滤，干燥，得到化合物II；具体合成路线如下：

(2)以化合物II为底物，在酮羰基还原酶、辅酶、酶循环氢供体、辅酶循环酶、助溶剂和缓冲液的存在下，进行生物催化反应生成洛匹那韦中间体，即化合物I；具体合成路线如下：

其中，所述步骤(1)具体为：

①反应瓶中加入化合物Ⅳ、二氯甲烷、三氟乙酸，控制温度20-25℃，反应4h，监控反应，原料反应完全；向体系中加饱和碳酸氢钠洗，分液；有机层再用水洗一次；有机层减压浓缩，至无溶剂蒸出，获得化合物Ⅲ；

②向反应瓶中加入碳酸氢钠、水、二氯甲烷和化合物Ⅲ，开启搅拌，降温至-5～5℃左右，向反应瓶内加入溴化钾和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(Tempo)，保持-5～5℃下滴加次 10％氯酸钠溶液，2～3h内滴完，2h后TLC监控反应体系；反应完全后，加入10％硫代硫酸钠溶液，升温至25℃下搅拌1h，水层用二氯甲烷萃取2次，合并有机层，浓缩至干，加入乙酸乙酯重结晶，0～5℃下析晶2h后抽滤，干燥，得到化合物II。

其中，所述步骤(2)中的辅酶优选为NADP+或NADPH。

其中，所述步骤(2)中的辅酶循环酶为异丙醇脱氢酶。

其中，所述步骤(2)中的辅酶循环氢供体和助溶剂为异丙醇。

其中，所述步骤(2)中化合物II与所述酮羰基还原酶的质量比为1:0.1～1。