[发明专利]一种质控菌株定量小球的制备及使用方法

说明书

本发明涉及微生物冻干球制备及使用技术领域，具体是一种质控菌株定量小球的制备及使用方法。制备方法包括如下步骤：(1)质控菌株的单菌落挑至液体培养基中，培养至对数生长期，得菌液；(2)取定量菌液至冻干菌种保护剂中，并用保护剂稀释得保护剂菌液；(3)取定量保护剂菌液，用液氮冷冻成球后进行预冻；(4)将步骤(3)得到预冻小球进行真空冷冻干燥，得干燥小球；(5)分装。使用方法：将1ml无菌生理盐水加入装有冻干菌球的西林瓶，充分溶解混匀，即可得到含一定菌数的菌液，直接用于后续实验。本发明制备得到的定量小球具有能够满足质控样品使用要求，制备方法简单，使用方便的有益效果。

技术领域

本发明涉及微生物冻干球制备及使用技术领域，具体是一种质控菌株定量小球的制备及使用方法。

背景技术

实验室数据可靠性和有效性是检验工作和科学研究的生命线。

利用微生物标准菌株进行检验方法学验证试验越来越受到重视，继《中国药典》要求进行微生物检验方法适用性试验后，保健食品和化妆品风险监测工作中也提出相关要求。利用标准菌种作为参考标准物质，进行药品、保健食品和化妆品微生物检验过程控制，是保障检验结果科学准确的重要环节，《中国药典》、保健食品和化妆品风险监测工作手册等均有明确要求。

微生物检验方法学适用性试验需要用到含有一定菌数的标准菌株，传统的梯度稀释方法操作繁琐，工作量较大。微生物定量质控菌株是考查实验室检验结果准确、可靠的重要工具，适用于食品、药品微生物检测的定量质控菌株是制约微生物检验标准化的一个瓶颈。

发明内容

本发明提供一种质控菌株定量小球的制备及使用方法，解决了现有技术中菌液梯度稀释方法操作繁琐，工作量较大的技术问题。

本发明是这样实现的：包括如下步骤：

(1)质控菌株的单菌落挑至液体培养基，培养至对数生长期，得菌液；

(2)取定量菌液至冻干菌种保护剂中，并用保护剂稀释得保护剂菌液；

(3)取定量保护剂菌液，用液氮定型成球后进行预冻；

(4)将步骤(3)得到预冻小球进行真空冷冻干燥，得干燥小球；

(5)分装。

作为一种优选的实施方案，步骤(2)中，所述冻干菌种保护剂包括以下组分及其质量配比：蛋白质10％，水溶性糖5％，冻干塑形剂10％，余量为水。

作为一种优选的实施方案，所述冻干菌种保护剂为蛋白质、水溶性糖与冻干塑形剂全部溶解后，经115℃高压灭菌20分钟，冷却所得。

作为一种优选的实施方案，所述蛋白质为人血清白蛋白、小牛血清、脱脂奶粉中的至少一种；所述水溶性糖为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、乳糖、半乳糖中的至少一种；所述冻干塑形剂为聚乙二醇4000、聚乙二醇8000及聚乙二醇20000、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种。

作为一种优选的实施方案，步骤(3)中，液氮冷冻过程中使用液氮冷冻小球装置，所述液氮冷冻小球装置包括保温容器，点样针和冷冻多孔板，所述保温容器内容纳液氮，所述冷冻多孔板置于所述保温容器内部，所述冷冻多孔板设有数个间隔板，所述间隔板纵横交叉形成数个冷冻空间，每个冷冻空间底部设冷冻孔，所述点样针置于所述保温容器上方，所述点样针底端距离液氮液面5-8cm，向所述冷冻孔滴菌液，待所有所述冷冻间隔空间均滴入一滴菌液，菌液冷冻成小球之后，再重复向所述冷冻空间滴加菌液的操作。

作为一种优选的实施方案，所述步骤(2)中，吸取菌液50ul。

作为一种优选的实施方案，所述步骤(2)中，菌液稀释100倍。

作为一种优选的实施方案，所述步骤(3)中，预冻条件为-35℃，2h。