[发明专利]ROCK抑制剂在促进卵母细胞基因Bmp15和Gdf9表达量上调中的应用

说明书

本发明公开了一种ROCK抑制剂在促进卵母细胞基因Bmp15和Gdf9表达量上调中的应用。其中，ROCK抑制剂Y27632可促进卵母细胞特异性基因Bmp15和Gdf9表达量上调，促进卵泡细胞增殖发育。本申请采用了无血清培养体系，同时，为了模拟卵泡在体内的生长环境，本研究采用了超低吸附培养板对卵泡进行培养，该培养板不仅可以使卵泡在整个发育过程中呈立体式生长方式，而且使卵母细胞周围的颗粒细胞得到更充分的营养物质和空间，可以较为有利于腔前卵泡的发育。同时，在添加抑制剂Y27632后，Gdf9和Bmp15表达量提升，有利于促进卵泡增殖发育。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种ROCK抑制剂在促进卵母细胞基因Bmp15和Gdf9表达量上调和防止纺锤体组装异常中的应用及其试剂盒。

背景技术

卵巢是雌性哺乳动物中重要的生殖内分泌器官，卵泡作为卵巢的基本结构与功能单位，在整个卵巢发育过程中发挥重要作用。近年来，肿瘤患者的年轻化趋势日益严重，虽然不断更新的医疗技术使这些患者的生存期得以延长，但主流技术放化疗严重损伤了女性生育能力。因此，放化疗前保存卵巢组织或未成熟卵泡，肿瘤愈后回移卵巢组织或卵泡体外成熟培养后，可作为维持女性生育能力或内分泌功能的有效手段。

Rho激酶(ROCK)是GTPase Rho的效应子，可协调多个细胞行为，如细胞增殖、凋亡、分裂、迁移、分化等。Y27632是ROCK通路的抑制剂，在细胞增殖和凋亡中起重要作用。但目前并未见ROCK抑制剂Y27632可提升卵母细胞特异性基因Bmp15和Gdf9表达量的相关记载。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种ROCK抑制剂在促进卵母细胞基因Bmp15和Gdf9表达量上调和防止纺锤体组装异常中的应用及其试剂盒，本研究拟探讨小鼠卵泡自腔前卵泡体外发育为成熟卵泡过程中，Y27632对卵母细胞的成熟及颗粒细胞的增殖等方面的影响，尤其是对卵母细胞特异性基因Bmp15和Gdf9表达量的影响。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

ROCK抑制剂在促进卵母细胞特异性基因Bmp15和Gdf9表达量上调中的应用。

进一步地，ROCK抑制剂为ROCK抑制剂Y27632。

一种促进卵母细胞特异性基因Bmp15和Gdf9表达量上调的药物，包括上述ROCK抑制剂。

一种提升卵母细胞质量促进卵母细胞发育的试剂，该试剂能提升基因Bmp15和Gdf9表达量。

进一步地，试剂包括上述ROCK抑制剂。

一种促进卵母细胞特异性基因Bmp15和Gdf9表达的试剂盒，试剂盒包括上述ROCK抑制剂。

一种防止卵母细胞纺锤体组装异常的药物，包括权利要求1或2所述的ROCK抑制剂。

一种卵母细胞冷冻保护剂，包括上述ROCK抑制剂。

一种卵母细胞体外培养试剂，包括上述ROCK抑制剂。

本发明的有益效果：

本申请采用了无血清培养体系，同时，为了模拟卵泡在体内的生长环境，本研究采用了超低吸附培养板对卵泡进行培养，该培养板不仅可以使卵泡在整个发育过程中呈立体式生长方式，而且使卵母细胞周围的颗粒细胞得到更充分的营养物质和空间，可以较为有利于腔前卵泡的发育。同时，在添加抑制剂Y27632后，Gdf9和Bmp15表达量提升，有利于促进卵泡增殖发育。

附图说明

图1为体外培养0、2、4天后的卵泡；

图2为免疫荧光染色检测卵母细胞纺锤体微管tubulin的分布；标尺示10μm；