[发明专利]一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，包括以下步骤：（1）外植体的消毒：在菲油果当年生枝条上截取带有顶芽的嫩枝，先洗洁精清洗，后在流水下冲洗，冲洗后在无菌操作台上用0.01%升汞杀菌消毒，无菌水冲洗后备用；（2）低温黑暗预培养：将准备好的外植体切去伤口后截取合适长度放入预培养基中，放入低温黑暗环境中进行一段时间预培养；（3）常规培养：将经过预培养的外植体转接到加入活性炭的常规培养基中进行常规培养。本发明降低了外植体消毒中污染率、褐变率高的问题；缩短了诱导周期，一周左右即可萌芽；简便易操作，能有效降低生产成本。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法。

背景技术

菲油果又名费约果、凤榴、菠萝番石榴，属桃金娘科常绿灌木或小乔木，枝叶四季常绿，树高可达5米至6米，叶厚革质，椭圆形对生，长5厘米至7厘米，深绿色，具油脂光泽，四季常绿。叶背面有银灰色细绒毛。枝叶修剪时散发出令人愉快的芳香，有益人体健康。其花、叶均具有极高的观赏价值。果实营养丰富，富含维生素C、叶酸、植物纤维，以及多种苷类和黄酮类物质，且具有排毒养颜、降血脂、抗癌等功效，有“水果中的中华鲟”之称。

菲油果是一种新优品种，集绿化、观赏、食用三位于一体，具有突出的市场优势，因此被园林行业的专家及同行所普遍看好。但由于其繁殖难，导致种苗缺乏，未能得到广泛应用。只有在日本、美国、澳大利亚等国家有专门的果园种植，供应市场。近年来，我国也有部分地区进行了菲油果的引种栽培，但是由于国内目前对于菲油果的研究应用尚处于起步阶段，种苗获得主要靠进口，市场缺口极大，种苗供不应求，因而限制了菲油果在我国的推广。

菲油果的繁殖一般以扦插为主，但是其扦插成活率较低，且要大量繁殖整齐划一的优良苗木，最佳方法就是植物组织培养技术。关于费油果组织培养的研究报告在国内外已有不少，但也存在部分问题。菲油果常用的外植体有种子、茎尖和茎段，种子作为外植体虽然简单方便且污染和褐变较少，但是不能完全继承母本的优良性状，采用茎尖虽然污染和褐变率低于茎段，但是其生长培养完全达不到茎段诱导的效果。茎段诱导培养速度远远大于茎尖，但是其褐变和污染率居高不下。

发明内容

本发明旨在解决上述问题，提供了一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，能够有效降低菲油果茎段外植体的污染率和褐化率，缩短新芽萌动的周期，提高诱导率。

按照本发明的技术方案，所述抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，包括以下步骤，

(1)外植体的消毒：在菲油果当年生枝条上截取带有顶芽的嫩枝，先洗洁精清洗，后在流水下冲洗，冲洗后在无菌操作台上用0.01％升汞杀菌消毒，无菌水冲洗后备用；

(2)低温黑暗预培养：将准备好的外植体切去伤口后截取合适长度放入预培养基中，放入低温黑暗环境中进行一段时间预培养；

(3)常规培养：将经过预培养的外植体转接到加入活性炭的常规培养基中进行常规培养。

进一步的，所述步骤(1)中洗洁精清洗时间为60～90s，流水冲洗后，采用升汞消毒的时间为6～8min，无菌水冲洗的次数为4～6次；

进一步的，所述步骤(2)中的预培养基为1/2MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8，低温黑暗环境环境的温度为5～15℃，培养时间为1～3d。

进一步的，所述步骤(3)中的常规培养基为1/2MS+6-BA0.5～1.5mg/L+活性炭1～3g/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8，温度25℃，光照12h/d。

本发明的有益效果在于：(1)降低了外植体消毒中污染率、褐变率高的问题；(2)缩短了诱导周期，一周左右即可萌芽；(3)简便易操作，能有效降低生产成本。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。