[发明专利]一种快速获得高滴度慢病毒的包装方法在审
| 申请号： | 202110236922.2 | 申请日： | 2021-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN112961841A | 公开（公告）日： | 2021-06-15 |
| 发明（设计）人： | 吕妍;曲红金;张伟;朱敏;叶成章;臧妍;姚仲;巩瑶瑶;覃佐菊;余佳莹;姜敏 | 申请（专利权）人： | 上海佐润生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/867;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海和华启核知识产权代理有限公司 31339 | 代理人： | 达晓玲 |
| 地址： | 200240 上海市闵*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 获得 高滴度慢 病毒 包装 方法 | ||
1.一种快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，包括：
(1)将慢病毒包装质粒、目的基因表达质粒、转染试剂、鱼精蛋白混合形成脂质体，其中所述慢病毒包装质粒为pRsv-REV、pMDLG-pRRE、pVSV-G三者提前预混合好的质粒混合物；
(2)将步骤(1)形成的脂质体加入工具细胞中转染并培养；
(3)收集培养的病毒上清，处理得到病毒液。
2.根据权利要求1所述的快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，pRsv-REV、pMDLG-pRRE、pVSV-G三者质量比例为5：3：2。
3.根据权利要求1所述的快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，步骤(1)中目的基因表达质粒与慢病毒包装质粒的质量比为1：1。
4.根据权利要求1所述的快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，步骤(1)中转染试剂的浓度为1mg/mL，转染试剂的体积用量是慢病毒包装质粒和目的基因表达质粒质量之和的3倍。
5.根据权利要求1所述的快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，步骤(1)中慢病毒包装质粒、目的基因表达质粒、转染试剂、鱼精蛋白混合静置30分钟后形成脂质体。
6.根据权利要求1所述的快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，步骤(2)中所述工具细胞为293T细胞。
7.根据权利要求1所述的快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，步骤(3)中收集培养的病毒上清，将病毒上清离心过滤，再超速离心，加入病毒保存液重悬收集得到病毒浓缩液。
8.根据权利要求1所述的快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，所述快速获得高滴度慢病毒的包装方法中全步骤使用完全培养基。
9.根据权利要求1所述的快速获得高滴度慢病毒的包装方法，其特征在于，所述快速获得高滴度慢病毒的包装方法中全步骤完成时间为3天。
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