[发明专利]基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法

说明书

本发明公开了基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法，涉及毒品检测技术领域，该方法包括将毒品‑牛血清白蛋白复合物包覆在96孔免疫基板孔底，制备用于特异性毒品检测的多孔免疫基板，当样品与相应抗体加入时，样品中相应毒品分子将与96孔免疫基板内固定的免疫原共同竞争生物素化抗体上的抗原结合位点，使孔板捕获到生物素化抗体与样品中的毒品含量负相关，然后以缓冲液轻柔冲洗两次，继续向体系中加入链霉亲和素以及转化酶@Biotin‑脂质体信标，加入表面活性剂后，转化酶由脂质体空腔释放，可催化蔗糖底物分解为葡萄糖，检测结果以家用血糖仪读出，该检测方法以简单的装置和输出方式迅速获知样本中毒品或相应滥用药物成分的定性和定量信息。

技术领域

本发明涉及毒品检测技术领域，具体是基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法。

背景技术

甲基苯丙胺(Amphetamine)、吗啡(morphine)、氯胺酮(ketamine)等物质，统称毒品，其滥用会带来人体思想、行为及身体状态扭曲等隐患，并导致严重后果。人体体液样品(尤其是尿液及唾液)中此类物质及其代谢物的现场快速检测，是确定药品滥用行为(特别是在竞技体育、刑事司法及危险驾驶等领域)最直接的途径之一，对于相关物质的管控及社会治安的维护具有重要意义。

迄今为止，用于体液样品中毒品检测的方法主要包括气相色谱/质谱法(GC/MS)、液相色谱/质谱法(LC/MS)以及酶联免疫吸附法(ELISA)。近几年来，电化学传感器和现场采集检测装置(POCT)也在该领域得以应用。在所有方法中，由于质谱法(MS)具有高准确度和灵敏度等特点，目前仍然被作为相关物质检测的“金标准”。然而，质谱技术通常涉及复杂的仪器使用和方法开发，因此其应用常常局限于设备完善的中心实验室或医院。ELISA试剂盒和电化学传感器原理相对简单且易于使用，但它们仍需依赖特定仪器(如荧光定量PCR仪、电化学工作站)用于信号读出及数据处理。现场采集检测装置，如胶体金检测试纸，集体液样品(主要是唾液)现场采集与快速分析于一体，且相关部门(SAMHSA)已明确规定此类装置可用于体液中相关物质的检测。但需要特别指出的是，商品化的现场采集检测装置，其分析灵敏度和通量均有限，且绝大多数只能提供定性检测结果，并不能完全满足现场快速、准确、定量分析的需求。相关物质的快速鉴定检测方法性能仍有待提高。

目前，家用血糖仪(PGM)是最经典的、可提供定量分析结果的即时采集和诊断仪器，同时，它具有便于携带、价格低廉、检测结果可信等优点。在传统观念中，血糖仪仅用于血液中葡萄糖含量的检测。为充分发挥其优势，家用血糖仪也可用来检测非葡萄糖靶标，如生物因子、疾病标志物及重金属离子等。因此，我们将蔗糖转化酶催化底物蔗糖生成葡萄糖的反应结合家用血糖仪定量平台，创造性地引入到毒品检测的信号输出过程中，建立普适性方法，用于体液样品中多种毒品快速检测。所建平台信号输出方式得以简化，从而使检测效率大大提高。后续反应借用生物素化脂质体(biotin-liposome)内部空腔装入更多转化酶，通过加入表面活性剂使其释放，催化底物转化生成更多葡萄糖对信号进行放大，得到更加灵敏和准确的检测结果。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供基于血糖仪信号读出的多种毒品快速检测方法，将蔗糖转化酶用作免疫反应的信号转化基团，催化蔗糖分解为葡萄糖，从而将目标物质的检测转化为葡萄糖含量的检测，进而转化为便携式家用血糖仪的读出值；本方法通过运用脂质体包裹蔗糖信号分子，实现信号放大，以实现对目标物的高特异性、高灵敏性、快速鉴定分析。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：包括以下步骤：

步骤一：首先制备用于特异性毒品检测的96孔免疫基板，将甲基苯丙胺、吗啡、氯胺酮等标准品通过化学合成法与牛血清白蛋白(BSA)偶联形成药品-BSA复合物，作为免疫原分别固定于96孔免疫基板孔底；

步骤二：体液样品中相应毒品成分将与96孔免疫基板内固定的免疫原共同竞争对应生物素化单克隆抗体上的抗原结合位点，使孔板捕获到生物素化抗体与样品中的毒品浓度负相关；