[发明专利]一种靶向调控白色脂肪棕色化的DNA纳米花药物制备方法

权利要求书

1.一种脂肪细胞靶向的DNA纳米花药物NFA，其特征在于，其由脂肪细胞靶向的适配体反向互补序列经滚环扩增产生DNA纳米花后和大蒜素结合而成；

所述DNA纳米花包含如SEQ ID NO:1所示的DNA适配体序列重复单元，该序列通过与金属镁离子堆积形成片层状的DNA纳米花结构；

所述DNA纳米花具有脂肪细胞靶向性和大蒜素高效装载能力，其与大蒜素的浓度比可达到1:1000～10000。

2.根据权利要求1所述的脂肪细胞靶向的DNA纳米花药物NFA，其特征在于，所述DNA纳米花经大蒜素压缩后形成的DNA纳米花药物，粒径分布在0.6～1 um之间。

3.根据权利要求1或2所述的脂肪细胞靶向的DNA纳米花药物NFA的制备方法，包括以下步骤：

1) 连接：包含有脂肪细胞适配体靶向序列的磷酸化DNA模板SEQ IDNO:2，与引物SEQID NO: 4混合于DNA连接酶缓冲液中，进行缓慢退火处理，退火之后的产物与连接酶进行连接反应，形成环化的DNA模板；

2) 聚合：将步骤1) 中环化的DNA模板与DNA聚合酶、dNTP和BSA在缓冲液中进行聚合反应，反应结束后，反应混合物在设定温度加热终止聚合反应，反应产物洗涤后，得到脂肪细胞靶向的DNA纳米花。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，磷酸化DNA模板浓度为8～12 μM，引物的浓度为8～12 μM，DNA连接酶的浓度为50～70 U/μL。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，退火参数为：90-98℃下保持2-10min，然后缓慢降温至室温，连接反应温度为20-28℃，反应时间为1-3h。

6.根据权利要求3-5任一所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，环化的DNA模板的浓度为0.6～0.8 μM，DNA聚合酶的浓度为8～12 U/μL，BSA的浓度为(0.04～0.06)%；聚合反应温度为28～32 ℃，聚合反应时间为18～30 h，聚合结束后，在60～70 ℃条件下8～12min灭活。

7.根据权利要求3-5任意一项所述的制备方法，包括以下步骤：向DNA纳米花溶液中加入大蒜素，设定温度20-30 ℃下在摇床上进行结合反应，反应完毕后离心，即可得到脂肪细胞靶向的DNA纳米花药物NFA。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的DNA纳米花溶液的浓度为0.1～0.4 μM，大蒜素的浓度为5～15 mM，两者的混合体积比为(0.5～1 .5) : (0.5～1 .5)。

9.根据权利要求1或2所述脂肪细胞靶向的DNA纳米花药物NFA或由权利要求3-8任一所述的制备方法获得的脂肪细胞靶向DNA纳米花药物在制备调节脂肪细胞能量代谢药物中的应用。