[发明专利]一种靶向CD96的双特异性抗体及其制备方法和用途

说明书

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种靶向CD96的双特异性抗体及其制备方法和用途。该双特异性抗体包含抗人CD96ScFv、抗人PD1ScFv和IgG4Fc突变体，其构型包括：CD96ScFv holes‑PD1ScFv knobes和CD96ScFv‑(G4S)4‑PD1ScFv–Fc。本发明首次将CD96和PD‑1结合，并且首次构建CD96‑PD1双特异抗体，本发明的双特异性抗体与PD1和CD96均具有较高的亲和力，CD96不仅在活化后的T细胞中的高表达，也在活化后的NK细胞中高表达，并且随着活化时间而增加表达量，CD96的加入可以大大降低由于PD1单一的抗体在治疗过程中引发的耐药问题。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种靶向CD96的双特异性抗体及其制备方法和用途。

技术背景

现目前，免疫检查点阻断剂应用于各种肿瘤的免疫疗法中。PD1作为T细胞表面的一个免疫检查点，当它与肿瘤细胞表面配体PD-L1和PD-L2之间相互作用时，启动下游信号通路并抑制T细胞激活，使用抗体阻断PD1与其配体的相互作用，已经证明在多种恶性肿瘤的临床治疗中有效，但由于PD1单一的抗体在治疗过程中会发生耐药。因此，光是阻断PD1，已经无法满足临床预期，开发双特异性抗体用于肿瘤治疗已成为一种迫切的需求。双特异性抗体由于同时靶向两个抗原或者同一抗原的不同的表位，拥有多样的作用机制以及灵活的靶点组合，已经有超过110种双特异性抗体进入临床研究的不同阶段。虽然针对联合抑制免疫检查点受体的双特异性抗体如靶向PD-1×CTLA-4的KN046，靶向PD1×LAG3的MGD013，靶向PD1和TIM3的RG7769等。

专利CN111196856A公开了一种能与HER2和PD1特异结合的双特异性抗体，其包含免疫球蛋白抗体IgG和两个相同的单链可变片段scFv，其中每个scFv包含可变区VH和可变区VL，VH与VL通过肽接头L1连接，每个scFv通过接头肽L2与IgG串联。

专利CN110506059A公开了一种特异性结合PD1和LAG3的双特异性抗体，所述双特异性抗体包含特异性结合程序性细胞死亡蛋白1(PD1)的第一抗原结合结构域和特异性结合淋巴细胞活化基因-3(LAG3)的第二抗原结合结构域。

专利CN106939050B公开了一种抗PD1和CD19双特异性抗体及其应用，该发明涉及抗PD1和CD19双特异性抗体及其应用，所述抗PD-1和CD19双特异性抗体、或其变体、或其功能性片段包括：特异性识别和结合免疫细胞表面抗原PD-1的结构域，其包括抗PD-1特异性抗体的重链可变区(抗PD-1VH)；以及特异性识别和结合CD19的结构域，其包括抗CD19特异性抗体的重链可变区(抗CD19VH)。

以上双特异性抗体在许多癌症中取得了显著成功，但并非所有患者都受益于这些疗法。因此，寻找新的免疫检查点受体成为一种趋势，Stephen J Blake等提出CD96，也是一种免疫检查点，CD96不仅在活化后的T细胞中的高表达，也在活化后的NK细胞中高表达，并且随着活化时间而增加表达量，它与免疫检查点分子TIGIT以及共活化分子CD226竞争性结合肿瘤细胞表面特异性抗原CD155和CD112，因此是一个理想的联合治疗的免疫检查点受体，并且目前，已有超过30种成熟的促进重链和轻链的正确匹配的双特异性抗体分子平台被使用。但是，当经典的双特异性抗体的两条重链和轻链同时在宿主细胞中表达时，会出现重链和轻链错配并产生无法去除的副产物，并且如何构建成为一种稳定的双特异性抗体也成为一种难题，而且目前还没有相关文献公开CD96与其他抗体结合使用。

发明内容

有鉴于此，本发明目的之一在于提供一种双特异性抗体及编码双特异性抗体的核酸序列、包含所述核酸序列的表达载体及宿主细胞，所述双特异性抗体可以特异性靶向CD96和PD1。

所述双特异性抗体包含n个抗人CD96 ScFv、n个抗人PD1 ScFv和IgG4的Fc突变段；所述n≥1。