[发明专利]一种用于体外细胞培养的中药含药血清制备及鉴定方法

说明书

本发明公开了一种用于体外细胞培养的中药含药血清制备及鉴定方法。所述方法详细阐述了如何制备中药动物含药血清和如何鉴定，该方法证实了实验所取动物血清中含有中药成分，解决了动物血清含有中药成分的正确灌胃方法，动物何时取血血清中含有中药成分且药物浓度相对较高，对血清中的药物如何鉴定等一系列问题，为体外细胞培养的中药含药血清的制备及相关中医药实验研究提供可靠资料。

技术领域

本发明涉及细胞实验及中药实验研究领域，具体涉及用于细胞培养实验用的中药动物含药血清的制备及鉴定方法。

背景技术

随着现代医学的发展，体外细胞培养技术已成为生命科学研究、疾病机制研究、药物筛选及生物制品生产等多个领域中基础且不可替代的技术手段。体外细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的一种培养技术。体外细胞的培养方式可分为贴壁培养、悬浮培养、固定化培养、微载体培养、空中纤维培养、微囊法培养等。目前体外细胞培养技术在肿瘤学、药理学及病毒学等研究领域的基础实验研究应用非常广泛，神经细胞、肝细胞、肠系膜细胞、平滑肌细胞、心肌细胞、内皮细胞及肿瘤细胞等机体生理病理细胞目前均可实现体外培养。

在药理学研究方面，外源化合物(西药)被直接用于靶细胞的培养，特别是大量候选药物的初始筛选阶段，优势在于可以根据筛选目的设计实验条件，短期内获得大量包括药物反应和细胞毒性在内的实验数据这一优势使标准化的细胞培养流程及自动化设备的使用成为可能，相关研究效率也大大提高。特别是在生物制品方面，细胞培养已经成为其最主要的生产方式之一，例如目前流感疫苗等多种疫苗由细胞发酵生产，大大缩短了相关研究的进程，加快了临床推广的速度。因此体外细胞培养技术在现代医学研究领域发挥了至关重要的作用。

目前西药用于体外细胞培养的技术已经非常成熟，但中草药用于体外细胞培养的方法仍存在较大的争议。中药成分非常复杂，除有效成分外，还含有非有效成分和杂质，甚至毒性成分等，很难确定一种或几种成分代表中药和中药复方的实际作用；如果将中药粗制品直接加入离体生物反应体系，可能导出假阳性或假阴性或相反的结果，对于可能存在较大研究前景的项目被早早扼杀。因此，寻找一种既符合实验要求、又能代表中药特别是复方疗效的细胞培养方法是亟待解决的问题。

对于中药及复方的体外细胞实验，干预方法从最初的粗提取物直接添加，逐步发展为以血清药理学为理论基础的含药血清添加，广泛应用于各领域实验研究中。中药粗提后直接添加是提取中药的有效成分，直接添加到细胞体系中的一种方法。传统的粗提取方法经过煎煮、过滤、浓缩等步骤，杂质仍较多、理化性质复杂，直接添加至细胞体系中不良影响较多，现代药剂提取技术可将粗提取物进行纯化，包括杂质的去除、酸碱度与渗透压的调整等，超细粉末等新技术的应用，使提取物的质量进一步提高，理化干扰因素进一步减少，可以将提取物纯化至含药量90％以上，可制成颗粒、粉剂或冻干粉，以便于保存，临近实验时再溶解、离心、过滤，添加至细胞培养基中使用。即便如此，中药提取物直接进行体外细胞实验还是存在诸多弊端，其主要包括：①粗提物既含有有效成分，也含有大量无效成分，能非特异性地影响和干扰体外实验结果，导致实验结果的假阳性；②粗提物的杂质、电解质、渗透压、酸碱度等对体外实验都可能造成一定影响；③传统的口服给药，中药复方进入人体后经过消化道消化吸收、肝肠循环等，可代谢产生新的物质，提取物的体外药理实验结果难以反映机体真实血药浓度下的药理作用及变化规律。