[发明专利]一种连翘叶中提取连翘苷的方法

权利要求书

1.一种连翘叶中提取连翘苷的方法，其特征在于，连翘叶采用水提取，先采用单因素试验分别考察加水量、提取温度、提取次数和提取时间对连翘苷得率的影响，再采用L₉(3⁴)正交实验法确定连翘叶中连翘苷的最佳提取工艺，提取方法包括：

S1、色谱条件的确定；

所述色谱条件中流动相乙腈与水的体积配比为21：79；流速为0.8mL﹒min^-1，检测波长为277nm，柱温为室温，进样量10μL，进样三次取平均值；

S2、对照品溶液标准曲线的绘制；

S2S1、称取干燥至恒重的连翘苷对照品5.00mg，置于50mL容量瓶中；

S2S2、加50mL甲醇溶解定容，摇匀，进样前过滤，过滤采用0.22μm有机滤膜；

S2S3、吸取对照品溶液0.2mL，0.4mL，0.5mL，0.8mL，1mL，2mL，5mL，10mL，置于10mL容量瓶中，定容，摇匀；

S2S4、根据连翘苷对照品浓度和峰面积绘制标准曲线，得到对照品溶液的浓度范围；

S3、单因素试验制备样品溶液

S3S1、将连翘叶粉碎，过目筛；

S3S2、称取连翘叶粉末10g，加20倍体积水，80℃煮40min，过滤，过滤采用三层纱布并过滤两次；

S3S3、将滤液混合浓缩至100mL，取10mL提取液置于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，摇匀，作为样品溶液备用；

S3S4、在其他条件相同时，分别选取加水量、提取温度、提取次数和提取时间4个因素进行单因素试验；

S4、在单因素试验的基础上，选择加水量、提取温度、提取次数、提取时间4个因素作为考察因素，每个因素设3个水平，用L₉(3⁴)正交表进行试验，以确定最佳工艺条件；

S5、精确称取9份各10g的连翘叶粉末，按照正交表的条件进行提取，以连翘苷的含量为考察指标进行比较，确定最佳提取条件；

所述步骤S3S4中不同加水量的提取试验步骤：

(1)称取连翘叶粉末，设置加水量梯度，在80℃下提取2次，每次提取60min；

(2)将样品溶液蒸发浓缩至50mL,取10mL样品溶液用甲醇定容至50mL容量瓶中，摇匀；

(3)在步骤S1色谱条件下检测其峰面积，计算其浓度；

所述步骤S3S4中不同温度提取试验步骤：

(1)精密称取5份10g连翘叶粉末，分别加入150mL水，在60，70，80，90，100℃下提取2次，每次提取60min；

(2)将5份样品溶液蒸发浓缩至50mL,取10mL样品溶液用甲醇定容至50mL容量瓶中，摇匀；

(3)在步骤S1色谱条件下检测其峰面积，计算其浓度；

步骤S3S4中不同次数提取试验步骤：

(1)精密称取5份10g连翘叶粉末，分别加入150mL水，在80℃下分别提取1，2，3，4，5次，每次60min；

(2)将5份样品溶液蒸发浓缩至50mL,取10mL样品溶液用甲醇定容至50mL容量瓶中，摇匀；

(3)在步骤S1色谱条件下检测其峰面积，计算其浓度；

所述步骤S3S4中不同时间提取试验步骤：

(1)精密称取5份10g连翘叶粉末，分别加入150mL水，在80℃下提取2次，时间分别为20，30，40，50，60min；

(2)将5份样品溶液蒸发浓缩至50mL,取10mL样品溶液用甲醇定容至50mL容量瓶中，摇匀；

(3)在步骤S1中的色谱条件下检测其峰面积，计算其浓度。