[发明专利]一种基于融合蛋白传感器的重金属离子检测方法

权利要求书

1.一种基于融合蛋白传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

（1）将金属硫蛋白-贻贝丝足蛋白-5的融合蛋白溶解于PBS制备成融合蛋白溶液，加入双氧水使融合蛋白的终浓度为1 mmol/L -5mmol/L，再加入多酚氧化酶，溶解混匀后将溶液均匀涂抹于玻碳电极表面，干燥后制得融合蛋白电化学传感器；

（2）以所述融合蛋白电化学传感器为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为辅助电极，将待测的重金属离子的标准溶液加入到酸性电解池中，进行差分脉冲扫描，记录差分脉冲伏安图，测量峰电流值；绘制电流与重金属离子浓度间的线性方程；

（3）以所述融合蛋白电化学传感器为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为辅助电极，将待检测的样品加入到酸性电解池中，进行差分脉冲扫描，记录差分脉冲伏安图，测量峰电流值，根据步骤（2）中的线性方程计算待检测样品中对应的重金属离子的浓度。

2.根据权利要求1所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中金属硫蛋白-贻贝丝足蛋白-5的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求2所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述金属硫蛋白-贻贝丝足蛋白-5的融合蛋白对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求1所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述金属硫蛋白-贻贝丝足蛋白-5的融合蛋白的制备方法包括：化学合成如SEQ ID No:1所示的融合蛋白，用表达载体进行连接得到重组载体，转化大肠杆菌得到重组大肠杆菌，将其诱导表达，经过沉淀、脱盐、柱层析分离、洗脱、脱盐、冻干得到融合蛋白。

5.根据权利要求1所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述待测的重金属离子为Hg²⁺、Cu²⁺、Ag⁺、Ni²⁺ 、Cd²⁺、Pb²⁺、Zn²⁺、Co²⁺、As³⁺、Cr²⁺中至少一种。

6.根据权利要求1所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中在-0.7到-0.4V电位范围内进行差分脉冲扫描。

7.根据权利要求1所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中所述融合蛋白溶液中融合蛋白的浓度为10~100mmol/L。

8.根据权利要求1所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中多酚氧化酶的用量与融合蛋白用量的比例为摩尔质量比1:400-1:80。

9.根据权利要求8所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述多酚氧化酶使用活力为400U/g的酶粗提物。

10.根据权利要求1所述的基于融合蛋白的传感器的重金属离子检测方法，其特征在于，所述酸性电解池中含有 pH 5.0的醋酸缓冲溶液。