[发明专利]一种淫羊藿、巴戟复方提取液的研究方法

权利要求书

1.一种淫羊藿、巴戟复方提取液的研究方法，其特征在于，包括如下过程：

S1、淫羊藿、巴戟复方提取液的制备：取淫羊藿、巴戟各1000g粗粉，加50％乙醇按渗漉法渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，加水850ml，滤过，滤液加糖100g、蜂蜜50g，溶解过滤，滤液加防腐剂适量，加水至1000ml，搅匀，分装，灭菌，即得；

S2、淫羊藿甙含量测定：(1)对照品溶液制备：精密称取经105℃干燥至恒重的淫羊藿甙对照品1.68mg，置25ml量瓶中，加甲醇13ml使溶解，加水稀释至刻度，即得；(2)供试品溶液制备：精密吸取样品1ml，加水4ml，用乙酸乙酯萃取3次，分别为20、20、15ml，合并醋酸乙酯溶液，蒸干，加甲醇13ml溶解，移至25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，放置30min，滤过，即得；(3)空白溶液的制备：取缺淫羊藿甙药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法处理；

S3、测定过程：(1)取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液、供试品溶液和对照品溶液的混合液，按色谱条件分别进样测定；(2)取不同量的对照品溶液进行测定；

S4、精密度试验：精密吸取同一样品溶液，重复进样5次，进样10ul；

S5、稳定性试验：同一批样品制成供试品溶液，当天进行含量测定，5天后再测定；

S6、重复性试验：同一批样品取5份，分别按含量测定方法测定；

S7、加样回收率试验：取已知含量的同一批样品，各定量加入对照品适量，然后按供试品溶液制备方法制备样品溶液，依法测定含量，计算回收率；

S8、不同乙醇浓度提取淫羊藿甙含量比较：精密称取淫羊藿粉各5g，分别精密加入35％、50％、70％、95％乙醇各50ml，精密称定，超声处理lh，原浓度乙醇补充减失量，滤过，各精密吸取5ml，分别水浴蒸干，各加52％甲醇，分别移人lOml量瓶中，用52％甲醇分别稀释至刻度，摇匀，放置30min，滤过，取滤液按银天口服液淫羊藿甙含量测定方法测定；

S9、供试液提取：(1)样品液：每毫升含淫羊藿：巴戟为1：1，相当于生药2g；(2)人参提取液：取红参去芦头，加水浸过药面，隔水加热提取两次，过滤，合并两次滤液，浓缩，配成含生药0.5g/ml的供试液；(3)盐酸普萘洛尔片：现有的盐酸普萘洛尔片临时配成混悬液；(4)己烯雌酚片：现有的己烯雌酚片临时配成混悬液；(5)甲基睾丸素片：现有的甲基睾丸素片临时配成混悬液；

S10、急性毒性试验：取18-20g小白鼠15只，雌雄兼用，间隔1.5h分两次灌胃给供试液，观察7天；

S11、常压耐缺氧试验：取18-22g小白鼠,雌雄兼用,随机分设为4组,每组分别灌胃给予等体积的供试液，对照组为蒸馏水，连续7天，于末次给药后1h将小白鼠放入内装10g钠石灰的250ml广口瓶中，每瓶1只,瓶口涂凡士林密封，以死亡为指标，立即计算动物的存活时间；

S12、抗疲劳试验：取18-22g小白鼠，雌雄兼用,随机分设4组,每组分别灌胃给予等体积供试液，对照组为蒸馏水，连续14天，末次给药后1h按体重的5％尾部负重，然后放入水深20cm、水温20℃的常水中立即计时，至小白鼠沉入水底死亡为止，记录时间；

S13、交配能力试验：取27-35g雄性小白鼠，随机分设4组，其中对照组为11只；样品高剂量组为10只、样品低剂量组为11只；甲基睾丸素组为16只；每组分别灌胃给予等体积的供试液，连续7天，于给药的第4天，取成熟的雌性小白鼠，灌胃给予己烯雌酚混悬液，连续3天，第3天阴道涂片检查，取动情期的雌鼠与上述给药雄性小白鼠按3：1合笼,合笼后早晚检查雌鼠阴栓,每天将受配的雌鼠取出,补入新的雌鼠，使雌雄比例保持3：1，连续观察3天，记录每天受配雌鼠数，样品高剂量组、样品低剂量组、甲基睾丸素组与对照组进行X²检验比较。

2.根据权利要求1所述的一种淫羊藿、巴戟复方提取液的研究方法，其特征在于，所述S1制备后的淫羊藿、巴戟复方提取液为深棕红色，较粘稠，放置后有少量沉淀。

3.根据权利要求1所述的一种淫羊藿、巴戟复方提取液的研究方法，其特征在于，在所述S3的测定过程中，取对照品溶液10ul注人液相色谱仪，记录色谱图峰面积，另取供试品溶液10ul，同法测定，按外标法以峰面积计算，计算公式：淫羊藿甙含量＝样品溶液峰面积×对照品溶液浓度×稀释倍数÷[对照品溶液峰面积×取样量]。

4.根据权利要求1所述的一种淫羊藿、巴戟复方提取液的研究方法，其特征在于，在所述S3的测定过程中，流动相：乙腈(色谱纯)-水-醋酸的比为25：75：4；流速：lml/min；柱温：室温；检测波长：270nm；灵敏感：0.02AuFs；进样量：10ul，淫羊藿甙主峰保留时间为31min。