[发明专利]一株变形假单胞菌znuA基因稳定沉默菌株及应用

说明书

本发明通过基因沉默技术构建了一株变形假单胞菌znuA基因稳定高效沉默菌株，然后通过人工感染实验确定znuA基因稳定高效沉默菌株对斜带石斑鱼的致病性，并利用dual RNA‑seq技术对野生菌株和znuA基因稳定高效沉默菌株感染后的斜带石斑鱼脾脏的转录组数据进行分析，同时对宿主和病原菌的转录组数据进行研究，从转录组层面探讨znuA基因在变形假单胞菌与斜带石斑鱼互作中的功能，进而揭示了znuA基因对变形假单胞菌毒力的影响。本发明所构建的菌株对斜带石斑鱼的致病力极显著下降，而且能够引起感染脾脏中变形假单胞菌和斜带石斑鱼转录组数据发生显著变化，因此该菌株可用于研究变形假单胞菌的致病机理。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，更具体涉及一株具有研究变形假单胞菌致病机理价值的菌株。

背景技术

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼、斜带石斑鱼等海水养殖鱼类“内脏白点病”的病原菌，每年造成的直接经济损失超亿元。

Zn(II)是细菌不可缺少的物质，存在于许多参与核酸代谢过程的蛋白质和酶中，以及一些核糖体蛋白中。在缺乏锌的情况下，ZnuABC和ZupT是许多细菌最保守的锌转运系统，ZnuABC失活会降低细菌的毒力和定植能力。ZnuABC转运体由ZnuA、ZnuB和ZnuC组成。ZnuA是一种可溶的周质成分，它捕获Zn(II)并将其传递给膜渗透酶(ZnuB)，而ZnuC提供离子通过内膜运输所需的能量。研究发现，ZnuA在Zn(II)摄取中起关键作用，znuA基因失活将导致细菌毒性的降低，ZnuB不能弥补ZnuA缺失的不足。已有研究表明，敲除胸膜肺炎放线菌znuA基因不仅能降低细菌的毒力，还能有效保护宿主免受同源或异源细菌的攻击。迄今为止，还没有关于变形假单胞菌znuA基因对宿主影响的报道。因此, 探明变形假单胞菌znuA基因在病原-宿主互作中的功能能够揭示其对变形假单胞菌致病性的意义。

本发明通过基因沉默技术构建了一株变形假单胞菌znuA基因稳定高效沉默菌株，然后通过人工感染实验确定znuA基因稳定高效沉默菌株对斜带石斑鱼的致病性，并利用dual RNA-seq技术对野生菌株和znuA基因稳定沉默高效菌株感染后的斜带石斑鱼脾脏的转录组数据进行分析，同时对宿主和病原菌的转录组数据进行研究，从转录组层面探讨znuA基因在变形假单胞菌与斜带石斑鱼互作中的功能，进而揭示了znuA基因对变形假单胞菌毒力的影响。本发明所构建的变形假单胞菌znuA基因稳定高效沉默菌株对斜带石斑鱼的致病力极显著下降，而且能够引起感染脾脏中变形假单胞菌和斜带石斑鱼转录组数据发生显著变化，因此该菌株可用于研究变形假单胞菌的致病机理，特别是从病原-宿主互作研究变形假单胞菌的致病机理有着独特的优势。

发明内容

本发明的主要目的是提供一株变形假单胞菌znuA基因稳定高效沉默菌株，揭示znuA基因在转录组层面对变形假单胞菌毒力的影响，明确了该菌株的应用范围；

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一株变形假单胞菌znuA基因稳定高效沉默菌株，所述菌株命名为Pseudomonas plecoglossicida znuA-RNAi，该菌株已于2019年9月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2019693，中国典型培养物保藏中心地址为中国武汉，武汉大学。