[发明专利]一种SM03单抗的活性检测方法及其在SM03单抗质量监控中的应用

权利要求书

1.一种SM03单抗活性的检测方法，包括如下步骤：通过测量SM03单抗在体外培养环境下对B淋巴瘤细胞的杀伤效果实现SM03单抗活性的检测。

2.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括如下步骤：将SM03单抗固定在酶标板上，孵育；然后加入含抗IgM抗体的B淋巴瘤细胞悬液，孵育；再通过检测孵育后B淋巴瘤细胞的存活率实现SM03单抗活性的检测。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述B淋巴瘤细胞为Ramos细胞或Daudi细胞。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述抗IgM抗体为羊抗人IgM抗体。

5.根据权利要求2-4任一所述的方法，其特征在于：所述检测孵育后B淋巴瘤细胞的存活率的试剂为Celltiter Glo试剂。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

1)将可吸附抗体的材料包被至酶标板上，洗涤；

2)将不同浓度梯度的SM03单抗溶液分别加入至步骤1)得到的酶标板中，孵育，洗涤；

3)将含抗IgM抗体的Ramos细胞悬液加入至步骤2)得到的酶标板中，孵育；

4)将Celltiter Glo试剂加入至步骤3)得到的酶标板中，震荡均匀后读取各孔的荧光值，并计算出各孔的相对荧光强度值；以SM03单抗浓度的对数值为横坐标，以相对荧光强度值为纵坐标，拟合四参数曲线，获得IC₅₀值，并根据IC₅₀值评价SM03单抗活性。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述1)中，所述可吸附抗体的材料为Protein A或Protein G或Protein L；

和/或，所述1)中，所述洗涤为用PBST进行洗涤；

和/或，所述1)中，所述洗涤的次数为3次；

和/或，所述2)中，所述不同浓度梯度的SM03单抗溶液的浓度分别为15000ng/mL、10000ng/mL、6667ng/mL、4444ng/mL、2963ng/mL、1975ng/mL、1317ng/mL、878ng/mL、585ng/mL、390ng/mL和260ng/mL；

和/或，所述2)中，所述SM03单抗溶液的加入量为100μL/孔；

和/或，所述2)中，所述洗涤为用PBS进行洗涤；

和/或，所述2)中，所述洗涤的次数为3次；

和/或，所述2)中，所述孵育的条件为室温孵育30min；

和/或，所述3)中，所述含抗IgM抗体的Ramos细胞悬液的细胞浓度为4×10⁵/mL；

和/或，所述3)中，所述抗IgM抗体的浓度为1μg/mL；

和/或，所述3)中，所述含抗IgM抗体的Ramos细胞悬液的加入量为100μL/孔；

和/或，所述3)中，所述孵育的条件为37℃、5％CO₂培养箱中孵育72h；

和/或，所述4)中，所述Celltiter Glo试剂的加入量为100μL/孔；

和/或，所述4)中，所述相对荧光强度值的计算方法为采用酶标仪读取各孔的荧光值，然后将各孔的荧光值减去对照孔的荧光值，得到各孔的相对荧光强度值；所述对照孔为将步骤2)中的SM03单抗溶液替换为抗体稀释液后得到的孔。

8.权利要求1-7任一所述的方法在SM03单抗质量检测或监控中的应用。

9.一种SM03单抗的质量检测或监控方法，包括如下步骤：按照权利要求1-7任一所述的方法获得SM03单抗的IC₅₀值，并根据IC₅₀值评价SM03单抗质量：若SM03单抗的IC₅₀值为900ng/mL-1700ng/mL，则所述SM03单抗质量合格，若SM03单抗IC₅₀值不为900ng/mL-1700ng/mL，则SM03单抗质量不合格。

10.一种产品，其包括抗IgM抗体和B淋巴瘤细胞；

所述产品的功能为如下a1)或a2)：

a1)SM03单抗的活性检测；

a2)SM03单抗的质量检测或监控。