[发明专利]一种AMH纳米抗体、试剂盒及在生殖领域的应用

说明书

本发明具体涉及一种AMH纳米抗体、试剂盒及在生殖领域的应用。AMH与人体内生殖相关的激素具有密切的联系，通过检测血清中AMH的含量可用于多种疾病的诊断或生殖功能相关的评价。目前基于抗原抗体原理进行检测的产品中，所述抗体大多鼠源型抗体，临床检测效果并不稳定。基于上述现状，本发明提供了一种AMH纳米抗体，所述纳米抗体具有良好的检测特异性和亲和力，可应用多种生殖相关疾病的检测。

技术领域

本发明属于纳米抗体开发技术领域，具体涉及一种AMH的纳米抗体、所述纳米抗体的编码基因、所述纳米抗体的抗原蛋白以及上述物质在药物组合物、药物及检测试剂盒中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

女性生育能力与其体内各类生殖激素和卵巢储备功能有着密切的联系。卵巢储备功能是卵巢产生卵子数量和质量的潜能，间接反映卵巢的功能，卵巢储备功能与生育和不孕症诊治关系密切，高效、准确的检测为临床医生全面了解女性的卵巢储备功能提供重要的参考信息，这对于科学制定个体化的生育计划，提高女性生育率具有重要意义。AMH对卵巢储备功能及卵泡发育发挥着重要的作用，能够反映整个生命周期的卵泡活性。女性AMH水平随着卵巢储备功能的变化而变化，AMH水平越高，说明卵泡数量越多，卵巢储备功能强，女性生育能力就较强。而随着年龄及各种因素逐渐消耗，AMH浓度也会随之降低，就代表着卵巢储备功能降低，也预示着女性生育力的减弱，直到绝经后无法测出。因此，检测AMH水平可以预测女性生育能力。

临床上，血清AMH水平的检测除了可用于卵巢功能储备的评估，还可用于控制性超排卵(COH)效果的预测、卵巢过度刺激(OHSS)的预测、多囊卵巢综合征(PCOS)的诊断和预后、卵巢颗粒细胞瘤的诊断和管理、男性性早熟和青春期延迟的诊断和鉴别诊断、男童的隐睾症和无睾症的诊断和儿童双性状态的鉴别诊断。AMH的检测具有广阔的市场前景，其诊断试剂盒市场开发潜力巨大。目前人AMH检测试剂盒国内以深圳市亚辉龙生物科技有限公司和广州市康润生物科技有限公司生产的抗缪勒氏管激素(AMH)定量检测试剂盒(酶联免疫法)为主，进口以贝克曼的AMH Gen II Assay和罗氏的电化学发光检测Elecsys AMH为主。针对上述现状，发明人认为，上述检测抗体均为传统的鼠源抗体，存在半衰期段、人源化之后抗原抗体亲和力减弱的缺陷，作为一种检测试剂的假阳性概率较高，无法满足临床检测血清中AMH的要求。

发明内容

针对上述研究背景，本发明目的在于提供一种能够满足临床检测的AMH相关抗体，基于该目的，本发明联想到提供一种AMH的纳米抗体，所述纳米抗体优选为AMH的骆驼源抗体。所述骆驼源单独克隆表达出来的VHH结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH晶体为2.5nm，长4nm，分子量只有15KDa，此也被称作纳米抗体(Nanobody,Nb)。VHH可溶性极高，不易聚集，能耐高温、强酸、强碱等致变性条件，适合于原核表达和各种真核表达系统，广泛用于开发治疗性抗体药物、诊断试剂、亲和纯化基质和科学研究等领域。

基于上述技术目的，本发明提供以下技术方案：

本发明第一方面，提供一种AMH的纳米抗体，所述纳米抗体的序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明提供的上述纳米抗体相比传统单克隆抗体具有更小的尺寸，并且具有良好的结合特异性，作为检测抗体相比现有的鼠源抗体更加稳定，亲和力得到显著的提升。

发明第二方面，提供编码第一方面所述纳米抗体的基因序列，或由于密码子简并性能够翻译的到第一方面所述纳米抗体氨基酸序列的基因序列。基于该基因序列，本领域技术人员可通过常规的基因工程手段获得第一方面所述纳米抗体，另外，本发明还提供一种基于动物免疫手段获取上述纳米抗体的方法。