[发明专利]响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺

说明书

本发明用酶解提取独一味粗多糖，以酶用量、温度、提取时间、提取次数为影响因素，以多糖提取率为考察因素，通过单因素考察筛选出多糖提取率的最佳影响因素。利用响应面设计，优化得到最佳提取工艺为：温度60℃，提取时间30min，酶药比2％，PH＝8。本发明通过单因素考察及RSM试验,确定独一味多糖的最佳提取工艺条件为提取时间60min，PH为8,提取温度为60℃；本研究的结果表明酶解提取独一味多糖是一种有效、操作方便、可靠和可行的方法，其最佳提取工艺条件为提取时间60min，PH为8,提取温度为60℃，酶药比2％。

技术领域

本发明涉及独一味多糖提取技术领域，具体涉及响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺。

背景技术

藏药独一味系少数民族用药，最早收载于藏族医药学巨著《四部医典》及《晶珠本草》中，距今已有一千二百年历史。其味甘、微苦，温，主接骨、干黄水。现代临床用于治疗跌打损伤、筋骨疼痛、骨松质发炎等症，具有明显的镇痛、消炎作用，疗效可靠。国内外研究报道，独一味具有抗氧化、抗炎镇痛的药理活性，但全部关注与独一味中的环烯醚萜类，对其中的多糖组分的生物学功能未见有报道。本研究通过对多糖结构的表征，为其抗氧化、免疫调节等生物活性的研究提取前期基础。天然植物多糖属于植物体内一类非常重要的生物大分子,同时也是有效维持和保证生物体生命活动能够正常运转的基本物质,具有抗肿瘤、免疫调节、抗病毒及抗氧化等多种药理作用,可作为天然的免疫调节剂,已成为国内外学者的研究热点之一。

目前，提取植物多糖的方法有热水浸提法、酸碱溶液提取法、微波提取法、超声提取法等多种方法。研究报道，使用水提醇沉法可获得独一味多糖，但该提取方法提取率低，而独一味为名贵中药，无法发挥其最大价值。酶尤其是果胶酶、纤维素酶、木瓜蛋白酶，其活性高、易得价廉，可应用于植物多糖的提取，因此本研究使用酶解提取，并优化其提取工艺。

发明内容

本发明的目的在于提供响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，包括以下步骤：

步骤一：将独一味粉末经80％的乙醇加热回流两次，脱脂、脱色、除去低聚糖和小分子杂质，挥干溶剂，得到处理样品；

步骤二：称取3g预处理样品，加入适量蒸馏水，浸泡2h，通过加酶量、酶解温度、Ph值单因素的控制，然后再水浴锅中提取，收集上清液并减压浓缩至原体积的20％以下，加入无水乙醇至乙醇最终浓度为80％，在4℃温度下醇沉24h，离心后收集沉淀，利用Sevag法脱蛋白，用截留分子量3500Da的透析袋流水透析48h，最后冻干得到独一味粗多糖；

步骤三：在步骤二单因素试验的基础上，利用Box－Behnken Design(BBD)中心组合设计，以PPs提取得率Y(％)为响应值，考察加酶量、酶解温度和pH值对提取得率的影响。

优选地，所述加酶量为1.0-3.0％；所述PH为4-8；所述酶解温度为20-60℃。

优选地，所述提取工艺中采用硫酸-苯酚法测定多糖含量；

PPs提取得率(Y)公式:Y(％)＝(M/W)×100％，其中M是多糖的含量，W代表样品净重；以葡萄糖浓度(C)为横坐标，吸光度(Abs)为纵坐标，线性拟合绘制葡萄糖准曲线，获得回归方程为:

Abs＝0.06329C-0.03835(R²＝0.9994)。

优选地，所述提取工艺中糖含量的测定方法为：