[发明专利]一种梓叶槭组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种梓叶槭组织培养快速繁殖方法。本发明以梓叶槭的种子为外植体，通过外植体的消毒、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养和试管苗移栽等等阶段，利用植物组织细胞的全能性和植物组织培养等生物技术进行梓叶槭优质种苗的规模化生产，有利于梓叶槭的保护和可持续利用。本发明的方法操作程序和培养基独特，消毒成功率高，并具有繁殖效率高、生长速度快、种苗品质好等特点，具有很好的市场前景。实施该发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。

技术领域：

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种梓叶槭组织培养快速繁殖方法。

背景技术：

梓叶槭(Acer catalpifolium Rehder)为槭树科槭属落叶乔木，为四川省特有种，属于国家二级重点保护植物，2012年被列为国家极小种群野生植物。其分布区域狭窄，野外种群数量少，结实率低，同时，胚常发育不全，特别是由于低温和果翅迫使种子休眠，而成熟后容易失水丧失发芽力，播种萌发率。

目前，国内虽已有梓叶槭组织培养的专利报道，以带芽茎段为外植体，污染率高。

发明内容：

本发明的目的是克服现有技术中的不足，进行梓叶槭种苗的规模化繁殖，提供一种梓叶槭组织培养快速繁殖方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种梓叶槭组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

a.外植体的消毒方法：取梓叶槭(Acer catalpifolium Rehder)的种子，去除果翅后消毒处理，然后接种到种子萌发培养基中培养，培养温度24-28℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天；所述的种子萌发培养基每升含有：赤霉素GA₃ 0.5-1.5毫克、蔗糖15-25克、琼脂适量(琼脂6克)，其余为1/2MS培养基，pH 5.8-6.0；

b.不定芽诱导：以种子发芽后20-30天，苗高2-3厘米时，切取下胚轴接种到不定芽诱导培养基中进行不定芽的诱导，培养温度24-28℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天，诱导出不定芽；所述的不定芽诱导培养基每升含有：激动素1-3毫克、椰子汁5-15毫升、蔗糖20-30克、琼脂适量(琼脂6克)，其余为改良的MS基本培养基，pH 5.8-6.0；

c.不定芽增殖：将诱导出的不定芽切割成单芽后继代培养于不定芽增殖培养基进行不定芽的增殖，培养温度24-28℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天；所述的不定芽增殖培养基每升含有：激动素0.1-0.3毫克、椰子汁5-15毫升、蔗糖20-30克、琼脂适量(琼脂6克)，其余为改良的MS基本培养基，pH 5.8-6.0；

d.生根培养：将3～4厘米高不定芽，切割成单芽后培养于生根培养基上进行生根，培养温度24-28℃，光照度1500-2000lx，光照12-16小时/天，得到试管苗；所述的生根培养基每升含有：吲哚乙酸0-0.1毫克、蔗糖10-20克、琼脂适量(琼脂6克)，其余为改良的MS基本培养基，pH 5.8-6.0；

e.试管苗移栽：在生根培养30-40天，试管苗长至4-5厘米高时，在自然光照下炼苗5-7天，然后洗去根部培养基，栽入栽培基质中培养，由此得到梓叶槭种苗；

所述的改良的MS基本培养基是将MS基本培养基中的硝酸钾替换为硫酸钾，硫酸钾含量为800毫克/升，其余成份不变。

所述的消毒处理具体为：先在体积分数75％酒精中浸泡10-30秒，用1.0％有效氯的次氯酸溶液浸泡3-5分钟，无菌水冲洗4-5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒5-8分钟，无菌水冲洗4-5次。

所述的栽培基质包括泥炭土和珍珠岩，所述的泥炭土和珍珠岩的体积比为(2-4):1。