[发明专利]双特异性EGFR/c-Met抗体

权利要求书

1.一种分离的双特异性表皮生长因子受体（EGFR）/肝细胞生长因子受体（c-Met）抗体，其包含：

a) 第一重链（HC1），其包含HC1恒定域3（HC1 CH3）和HC1可变区1（VH1）；

b) 第二重链（HC2），其包含HC2恒定域3（HC2 CH3）和HC2可变区2（VH2）；

c) 第一轻链（LC1），其包含轻链可变区1（VL1）；和

d) 第二轻链（LC2），其包含轻链可变区2（VL2），

其中所述VH1和所述VL1配对以形成特异性结合EGFR的第一抗原结合位点，所述VH2和所述VL2配对以形成特异性结合c-Met的第二抗原结合位点，所述HC1在所述HC1 CH3中包含至少一个替换，并且所述HC2在所述HC2 CH3中包含至少一个替换，并且当根据EU索引对残基进行编号时，所述HC1 CH3中的替换和所述HC2 CH3中的替换在不同氨基酸残基位置处发生，其中

i) 所述VH1包含分别为SEQ ID NO: 210、211和212的重链互补决定区（HCDR）1（HCDR1）、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；并且

ii) 所述VL1包含分别为SEQ ID NO: 213、214和215的轻链互补决定区（LCDR）1（LCDR1）、LCDR2和LCDR3氨基酸序列；

iii) 所述VH2包含分别为SEQ ID NO: 216、217和218的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列；并且

iv) 所述VL2包含分别为SEQ ID NO: 219、220和221的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中：

a) 所述抗体为人抗体，和其中所述VH1、所述VL1、所述VH2和所述VL2分别包含SEQ IDNO: 189、190、193和194的氨基酸序列；和/或

b) 其中所述抗体抑制NCI-H292、NCI-H1975或SKMES-1细胞系中胞外信号相关激酶1和2（ERK1/2）的磷酸化，其中与用包含重链3（HC3）和轻链3（LC3）的对照单价EGFR抗体以及包含重链4（HC4）和轻链4（LC4）的对照单价c-Met抗体的混合物抑制NCI-H292、NCI-H1975或SKMES-1细胞系中ERK1/2的磷酸化的IC₅₀值相比，所述抗体的IC₅₀值小至少约10倍、小至少约20倍、小至少约30倍、小至少约40倍、小至少约50倍或小至少约60倍，其中

所述HC3与所述HC1、所述LC3与所述LC1、所述HC4与所述HC2、以及所述LC4与所述LC2分别具有相同的氨基酸序列，并且

通过夹心免疫测定法，将抗磷酸化ERK1/2抗体用作捕获抗体并将与电化学发光化合物缀合的结合于非磷酸化和磷酸化ERK1/2的抗体用作检测抗体，在全细胞裂解物中测量ERK1/2的磷酸化；

任选其中：

i) 所述抗体以约2×10^-9M或更小、约1×10^-9M或更小、或约1×10^-10M或更小的IC₅₀值抑制ERK1/2的磷酸化；和/或

ii) ERK1在残基Thr202和Tyr204处被磷酸化，并且ERK2在残基Thr185和Tyr197处被磷酸化；和/或

c)所述抗体抑制NCI-H1975细胞系中蛋白激酶B（AKT）在Ser473处的磷酸化，其中与用包含所述HC3和所述LC3的对照单价EGFR抗体以及包含所述HC4和所述LC4的对照单价c-Met抗体的混合物抑制NCI-H1975细胞系中AKT在Ser473处的磷酸化的IC₅₀值相比，所述抗体的IC₅₀值小至少约70倍，其中

所述HC3与所述HC1、所述LC3与所述LC1、所述HC4与所述HC2、以及所述LC4与所述LC2分别具有相同的氨基酸序列，并且

通过夹心免疫测定法，将结合于非磷酸化和磷酸化AKT的抗体用作捕获抗体并将与电化学发光化合物缀合的抗磷酸化AKT Ser473抗体用作检测抗体，在全细胞裂解物中测量AKT在Ser473处的磷酸化；任选其中所述抗体以1×10^-9M或更小的IC₅₀值抑制AKT在Ser473处的磷酸化；和/或

d) 其中所述抗体抑制NCI-H1975细胞系中AKT在Thr308处的磷酸化，其中与用包含所述HC3和所述LC3的对照单价EGFR抗体以及包含所述HC4和所述LC4的对照单价c-Met抗体的混合物抑制NCI-H1975细胞系中AKT在Thr308处的磷酸化的IC₅₀值相比，所述抗体的IC₅₀值小至少约100倍，其中

所述HC3与所述HC1、所述LC3与所述LC1、所述HC4与所述HC2、以及所述LC4与所述LC2分别具有相同的氨基酸序列，并且

通过夹心免疫测定法，将结合于非磷酸化和磷酸化AKT的抗体用作捕获抗体并将与电化学发光化合物缀合的抗磷酸化AKT Thr308抗体用作检测抗体，在全细胞裂解物中测量AKT在Thr308处的磷酸化；

任选其中所述抗体以1×10^-9M或更小的IC₅₀值抑制AKT在Thr308处的磷酸化；和/或

e) 其中所述双特异性抗体在EGFR残基K489、I491、K467和S492处结合具有以SEQ IDNO: 73示出的氨基酸序列的EGFR且在残基PEFRDSYPIKYVHAF（SEQ ID NO: 238）和FAQSKPDSAEPMDRSA（SEQ ID NO: 239）处结合c-Me；和/或

f) 其中所述抗体抑制NCI-H292或NCI-H1975细胞的生长，其中当NCI-H292或NCI-H1975细胞在低附着条件下生长时，与用西妥昔单抗抑制NCI-H292或NCI-H1975细胞的生长的IC₅₀值相比，所述抗体的IC₅₀值小至少约300倍、小至少约400倍、小至少约500倍、小至少约600倍、小至少约700倍或小至少约800倍；和/或

g) 其中所述抗体抑制SCID Beige小鼠中表达HGF的SKMES-1细胞瘤的生长，当所述双特异性抗体和西妥昔单抗以20mg/kg剂量施用时，与西妥昔单抗相比，在第36天，所述抗体的T/C百分比（%）值小至少500倍；和/或

h) 其中所述抗体中和EGFR与c-Met信号传导。