[发明专利]毛竹PeAPX5基因及应用

说明书

本发明公开了毛竹PeAPX5基因及应用。毛竹PeAPX5基因及其编码蛋白质的序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。本发明首次从毛竹中克隆得到PeAPX5基因并通过在拟南芥中过表达该基因验证了其生物学功能。PeAPX5基因具有调控植物抗逆性的功能，能够为毛竹转基因研究提供有力工具，为毛竹抗性分子育种提供有价值的候选基因。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体地说，涉及毛竹PeAPX5基因及应用。

背景技术

毛竹(Phyllostachys edulis)是禾本科(Gramminales)竹亚科(Bambusoideae)刚竹属(Phyllostachys)散生竹种，在涵养水源、固土固沙、生物质能源开发等方面有巨大潜力，是重要的生态、经济和文化资源。然而，世界范围内的高温干旱问题是制约竹林生产的主要逆境因子。竹类植物在生长过程中需要充足的水分，尤其是笋的形成和生长，与水分供应十分密切。干旱严重影响了竹子的产量和质量。因此，进行竹种改良，培育抗旱性强的竹子新品种非常必要，也是扩大竹子分布范围，实现南竹北移的的一种重要的途径。而研究逆境条件下毛竹体内相关基因的功能则是进行新品种培育的分子基础工作，对于揭示竹子的抗逆分子机制，进而突破常规育种的局限性，加快竹子育种进程具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供毛竹PeAPX5基因及应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供毛竹PeAPX5基因，其为编码如下蛋白质(a)或(b)的基因：

(a)由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)SEQ ID NO:2所示序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(a)衍生的蛋白质。

毛竹PeAPX5基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明采用如下方法克隆得到PeAPX5基因：

⑴以毛竹叶片为材料提取总RNA，并将提取得到的总RNA反转录为cDNA。本发明中，毛竹总RNA的提取采用本领域常用的提取细胞总RNA的方法即可，本发明的实施例中具体可采用Trizol法。

⑵在提取得到毛竹总RNA后，将所述总RNA反转录合成cDNA。在本发明中，cDNA的合成采用本领域常规的cDNA合成方法即可，无其他特殊要求；本发明的实施例中具体可采用Promega公司的cDNA合成试剂盒进行cDNA的合成。

⑶在得到cDNA之后，进行PeAPX5基因的PCR扩增，得到目的片段。本发明中，PeAPX5基因PCR扩增的体系优选为20μL体系，包括：10×PCR Buffer 2.0μL，2.5mM dNTP Mix 2.0μL，10μM上、下游引物各1.0μL，cDNA模板2.0μL，5U/μL LA Taq DNA聚合酶0.2μL，ddH₂O 11.8μL。PCR扩增反应程序优选为：94℃预变性5min；94℃变性30s；94℃退火30s；72℃延伸45s，35个循环；72℃10min；4℃保存。

用Oligo7软件设计引物扩增PeAPX5基因。引物序列如下：

上游引物：5′-ATGGCGAAGAACTACCCGGC-3′

下游引物：5′-TATGCATCAGCAAACCCCAGTTC-3′

⑷PCR扩增得到目的片段后，将所述目的片段进行测序，得到PeAPX5基因。在PCR扩增后优选对目的片段进行纯化，对于纯化的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的DNA纯化试剂盒进行即可。

⑸纯化完成后，优选将所述纯化后的目的片段连接到pGEM-T Easy载体，导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，经菌落PCR验证为阳性克隆后进行测序。