[发明专利]膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及其制备方法

说明书

本发明提供了膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及制备方法。该方法包括1)提供未成膜的壳聚糖，其中所述壳聚糖为未经预交联的壳聚糖或经预交联的壳聚糖；2)提供所述未成膜的壳聚糖与细胞、多肽、寡肽或蛋白质的混合液，其中在所述混合液中，所述未成膜的壳聚糖为溶解状态；3)将交联剂与所述混合液混合，得到所述壳聚糖与所述细胞、多肽、寡肽或蛋白质的共交联产物；4)将所述共交联产物干燥，得到膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质；其中，当步骤1)使用未经预交联的壳聚糖时，该方法还包括5)将所述膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质与磷酸盐混合，使其中的壳聚糖分子之间进行交联。所述方法为一步法，工艺简单，节省时间和成本。

技术领域

本发明属于固定化细胞和固定化蛋白领域，具体而言，涉及膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及其制备方法。

背景技术

酶的应用越趋广泛，而固定化酶因其易于与产品分离并可重复使用，所以常用于工业用途以减低生产成本。酶的固定化方法众多，如物理吸附、亲和联结、共价交联、凝絮包埋等(参见文献“Roger A.Sheldon,2007,Advanced SynthesisCatalysis,349:1289-1307”)。

现有的载体的制作过程复杂，例如：制备硅载体需要使用多种有机溶液(袁中一、吴星佳、李士芸、吉鑫松，“一种珠状壳聚糖载体的制备及其应用于酶固定化的方法”，中国专利申请公开号：

CN1407103A)；制备多孔复合氧化物需要使用高温高压(权镐真、洪舜教、白桂东、金惠真、朴东坤，“多孔复合氧化物制造方法”，中国专利申请公开号：CN1171295A)。而一般凝胶载体制作过程简单，只需使把凝胶溶液用注射器滴入能使其凝胶化的溶液制成凝胶颗粒即可。例如：把海藻酸钠滴入氯化钙溶液、把卡拉胶滴入氯化钾溶液。不过这种技术在工业生产时需要设计特定的设备进行生产(曾昭景、欧阳平凯、潘光亮，“固定化细胞载体成型机”，中国专利申请公开号：CN2181511Y)，这大大增加了生产成本。因此，制备简单及低生产成本的固定化方法一直是本领域研究人员的目标。

发明内容

为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供了膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及其制备方法。

具体而言，本发明提供了：

(1)一种制备膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质的方法，包括以下步骤：

1)提供未成膜的壳聚糖，其中所述壳聚糖为未经预交联的壳聚糖或经预交联的壳聚糖；

2)提供所述未成膜的壳聚糖与细胞、多肽、寡肽或蛋白质的混合液，其中在所述混合液中，所述未成膜的壳聚糖为溶解状态；

3)将交联剂与所述混合液混合，得到所述壳聚糖与所述细胞、多肽、寡肽或蛋白质的共交联产物；

4)将所述共交联产物干燥，得到膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质；

其中，当步骤1)使用未经预交联的壳聚糖时，所述方法还包括：

5)将步骤4)所得膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质与磷酸盐混合，使其中的壳聚糖分子之间进行交联。

(2)根据(1)所述的方法，其中通过将磷酸盐与未经预交联的壳聚糖混合来制备所述经预交联的壳聚糖。

(3)根据(1)或(2)所述的方法，其中所述磷酸盐与所述未经预交联的壳聚糖的重量比为(0.1-20):1。

(4)根据(1)或(2)所述的方法，其中所述磷酸盐选自多聚磷酸盐、多偏磷酸盐和焦磷酸盐中的一种或多种。

(5)根据(1)所述的方法，其中步骤3)中所述交联剂包括多元醛化合物和京尼平。

(6)根据(1)所述的方法，其中所述未成膜的壳聚糖包括壳聚糖粉末和壳聚糖溶液。