[发明专利]比利时杜鹃花FLS基因、用于克隆该基因的引物组及其克隆方法和荧光定量引物组

说明书

本发明公开了比利时杜鹃花FLS基因、用于克隆该基因的引物组及其克隆方法和荧光定量引物组，该基因为黄酮醇合成酶基因RhFLS，其保守域的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，全长核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明首次从比利时杜鹃花中克隆得到杜鹃花黄酮醇合成酶基因RhFLS，黄酮醇合成酶基因RhFLS为杜鹃花花色形成的关键基因之一，可以用于通过转基因等生物技术方法培育不同花色杜鹃花，为今后利用基因工程技术改良杜鹃花品质提供了重要的理论依据，具有广阔的应用前景和极大的经济价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是比利时杜鹃花FLS基因、用于克隆该基因的引物组及其克隆方法和荧光定量引物组。

背景技术

比利时杜鹃，又名西洋杜鹃，杜鹃花属(Rhododendron L.)，是由映山红(Rhododendron simsii Planch.)、皋月杜鹃(Rhododendron indicum(L.)Sweet)、毛白杜鹃(Rhododendron mucronatum(Blume)G.Don)反复杂交得到的品种。颜色多样，四季开花，常作为室内盆景，是杜鹃花花色育种的重要材料，但目前通过分子手段的花色育种在百合、牡丹、玫瑰、月季等花中报道较多，杜鹃目前大多还是采用杂交育种的手段。比利时杜鹃花色形成的机制研究报道甚少。花色素是影响植物花色呈色的重要因素，花色素多且复杂，主要分为三大类别：类黄酮(Flavonoid)、类胡萝卜素(Carotenoid)和生物碱(Alkaloid)。前期研究表明，影响杜鹃花花色的花色素主要是类黄酮(Flavonoid)，其花色合成主要通过类黄酮合成途径，合成的花青素使得花瓣具有白、红、粉红、紫以及淡紫等颜色，但目前杜鹃花类黄酮生物合成机理尚不清晰。

在花色素合成途径中，是以香豆酰辅酶A(4-coumaroyl-CoA)和丙二酰辅酶A(malonyl-CoA)为前体，在查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)的作用下香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A缩合成四羟基查尔酮(Chalcone)，之后查尔酮异构酶(chalconeisomerase,CHI)使四羟基查尔酮发生立体异构变为无色柚皮素(Naringenin)，柚皮素继续被黄烷酮-3-羟化酶(flavanone3-hydroxylase,F3H)催化生成二氢山奈酚(dihydrokaelpferol,DHK)，DHK可以被类黄酮3’-羟化酶(flavonoid 3’-hyroxylase,F3’H)催化进而转变二氢槲皮素(dihydroquercetin,DHQ)，也可以被类黄酮3’,5’-羟化酶(flavonoid 3’,5’-hyroxylase,F3’5’H)的催化转变为二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)。DHK、DHQ和DHM即可被FLS催化生成黄酮醇，也能被二氢黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)催化生成无色花色素。FLS与DFR有相同的底物竞争关系，对植物中花青素和黄酮醇含量的积累有重要影响。因此研究FLS的功能不仅能探讨植物中花青素和黄酮醇的生物合成途径，对植物花色也有重要影响。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术的不足，提供一种比利时杜鹃花FLS基因、用于克隆该基因的引物组及其克隆方法和荧光定量引物组。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：比利时杜鹃花FLS基因，该基因为黄酮醇合成酶基因RhFLS，其保守域的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，全长核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

用于克隆比利时杜鹃花FLS基因的引物组，包括用于扩增SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的引物FLS-F1、FLS-R1、FLS-F2和FLS-R2，其序列分别为：

FLS-F1：GGAGAGCTACGCAAACGACC；

FLS-R1：TGGCAGCTAGAGGTTACGACTT；