[发明专利]一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗，包括：脂质体，以及结合或包裹于脂质体中的VP27蛋白；脂质体由卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂按薄膜扩散法制得。本发明还公开了上述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，包括如下步骤：将卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂混合，溶于有机溶剂中，减压旋蒸除去有机溶剂，得到膜状空白脂质体；向膜状空白脂质体中加入磷酸盐缓冲液和玻璃珠，水平摇床进行水化得到混悬液；将混悬液分离，加入VP27蛋白溶液，超声处理得到鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗。本发明还公开了上述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗在制备预防或治疗雏鹅痛风病的药物中的应用。

技术领域

本发明涉及动物疫苗技术领域，尤其涉及一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

疫苗是预防和控制传染病最有效、最经济的手段，可追溯至最早应用于接种的牛痘，发展至今已有多种多样的疫苗。目前疫苗在禽类养殖生产中的应用已然是不可或缺的。传统疫苗包括灭活疫苗和弱毒疫苗，主要是通过灭活或减毒病原体来制备疫苗，但灭活或减毒的病原体，因为其成分比较复杂，并存在毒力返强等问题，所以其安全性一直让人担忧。而新型亚单位疫苗存在免疫原性弱、稳定性差、细胞微环境中易降解等问题，利用合适的递呈载体可以很好的解决这个问题。

鹅星状病毒是引起鹅痛风病的一个重要病原。鹅痛风病常在春、秋季暴发，临床表现为排泄白色或绿色稀便，关节出现肿大并伴有尿酸盐沉积和瘫痪。尸检时，在胆囊、关节剖面、输尿管和心、肝、气囊、气管、腺胃的表面以及胆汁内发现尿酸盐沉积，肾脏肿大发白。该病历时7-10d，发病率高达80-90％，若不及时治疗，死亡率可达20-70％。

目前雏鹅痛风病对鹅的养殖生产造成了巨大的影响，但尚无有效的商品化疫苗预防鹅星状病毒的感染。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明的目的是通过原核表达技术，表达鹅星状病毒的主要抗原决定簇蛋白——鹅星状病毒纤突蛋白，鹅星状病毒纤突蛋白能刺激机体产生具有中和活性的抗体，从而达到保护雏鹅免受鹅星状病毒感染，为预防雏鹅痛风病带来了新的方法。

由于脂质体作为一种新型疫苗佐剂，是由非免疫原性、无毒性和可生物降解的磷脂组成的能够包裹抗原的类脂小球，非常适合作为递呈亚单位疫苗的工具，具有安全、耐受、缓释抗原等优点，本发明利用基因工程方法表达具有免疫原性的鹅星状病毒囊膜蛋白(VP27蛋白)，采用薄膜扩散法制备空白脂质体，利用超声法将VP27蛋白包被在脂质体双分子层中。具体如下：

一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗，包括：脂质体，以及结合或包裹于脂质体中的VP27蛋白；

脂质体由卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂按薄膜扩散法制得。

上述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，包括如下步骤：

S1、将卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂混合，溶于有机溶剂中，减压旋蒸除去有机溶剂，得到膜状空白脂质体；

S2、向膜状空白脂质体中加入磷酸盐缓冲液和玻璃珠，水平摇床进行水化得到混悬液；

S3、将混悬液分离，加入VP27蛋白溶液，超声处理得到鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗。

优选地，S1中，卵磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二油酰基卵磷脂、二油酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱中至少一种，抗氧化剂为维生素E、维生素A、维生素C中至少一种，有机溶剂为乙醇、乙醚、氯仿中至少一种。

优选地，S1中，卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂的质量比为1.5-2.5：0.8-1.2：0.06-0.14。

优选地，S2中，磷酸盐缓冲液的pH值为7.3-7.5。

优选地，S2的水化过程中，水化温度为36-38℃，摇床转速为180-220r/min，水化时间为0.8-1.2h。