[发明专利]使用牛磺酸或亚牛磺酸产生去核红系细胞的方法

权利要求书

1.一种产生去核红系细胞群体的方法，所述方法包括：

(a)将一定体积的红系祖细胞的第一细胞培养物放置到包含在器皿内的第二培养基中以提供第二细胞培养物；

(b)将所述第二细胞培养物培养约2天至约15天；

(c)将一定体积的步骤(b)的所述第二细胞培养物放置到包含在器皿内的第三培养基中以提供第三细胞培养物，其中所述第三培养基包含约1.0g/L-37.5g/L牛磺酸和/或约1.0g/L-37.5g/L亚牛磺酸；

(d)将步骤(c)的所述第三细胞培养物培养约5天至约20天，

其中在步骤(d)之后，所述第三培养基包含去核红系细胞群体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)中的所述器皿是灌注生物反应器，步骤(b)中的所述培养是灌注培养，步骤(c)中的所述器皿是灌注生物反应器，并且步骤(d)中的所述培养是灌注培养。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述方法进一步包括在步骤(a)之前：

(i)将多个红系祖细胞放置到包含在器皿内的第一培养基中，以提供初始细胞密度为约0.1x10⁵个细胞/mL至约2x10⁶个细胞/mL的所述第一细胞培养物；以及

(ii)将所述第一细胞培养物分批或补料分批培养约1天至约15天。

4.根据权利要求3所述的方法，其中步骤(ii)中的所述分批或补料分批培养进行约5天至约12天。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述灌注培养进行约4天至约10天。

6.根据权利要求2-5中任一项所述的方法，其中步骤(d)中的所述灌注培养包括：

(i)在第一时间段内向所述第三细胞培养物中添加额外体积的所述第三培养基，以及

(ii)在第二时间段内向所述第三细胞培养物中添加额外体积的第四培养基，其中所述第四培养基包含约1.0g/L-37.5g/L牛磺酸和/或约1.0g/L-37.5g/L亚牛磺酸。

7.根据权利要求6所述的方法，其中(i)中的所述第一时间段为约1天至约7天，并且(ii)中的所述第二时间段为约1天至约10天。

8.根据权利要求2-7中任一项所述的方法，其中步骤(d)的所述灌注培养进行约8天至约15天。

9.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)中的所述培养是分批或补料分批培养，步骤(c)中的所述器皿是灌注生物反应器，并且步骤(d)中的所述培养是灌注培养。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述方法进一步包括在步骤(a)之前：

(i)将多个红系祖细胞放置到包含在器皿内的第一培养基中，以提供初始细胞密度为约0.1x10⁵个细胞/mL至约2x10⁶个细胞/mL的所述第一细胞培养物；以及

(ii)将所述第一细胞培养物分批或补料分批培养约1天至约15天。

11.根据权利要求10所述的方法，其中步骤(ii)中的所述分批或补料分批培养进行约5天至约12天。

12.根据权利要求9-11中任一项所述的方法，其中步骤(b)的分批或补料分批培养进行约4天至约10天。

13.根据权利要求9-12中任一项所述的方法，其中步骤(d)中的所述灌注培养包括：

(i)在第一时间段内向所述第三细胞培养物中添加额外体积的所述第三培养基，以及

(ii)在第二时间段内向所述第三细胞培养物中添加额外体积的第四培养基，其中所述第四培养基包含约1.0g/L至约37.5g/L牛磺酸和/或1.0g/L至约37.5g/L亚牛磺酸。