[发明专利]用于培养VERO细胞的低血清培养基组合物及其用途

说明书

本发明涉及用于培养Vero细胞的低血清培养基组合物，以及Vero细胞培养方法和病毒生产方法，每种方法都使用该组合物。

技术领域

相关申请的交互引用

本申请基于2019年12月24日提交的韩国专利申请第10-2019-0174356号并要求其优先权，该韩国专利申请的公开内容特此通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明涉及用于培养Vero细胞的低血清培养基组合物，以及培养Vero细胞的方法和生产病毒的方法，这两种方法都使用该组合物。

背景技术

Vero细胞是在制造病毒疫苗中被广泛批准并使用的连续细胞系。Vero细胞最初是从提取自非洲绿猴的肾细胞中分离的，并且已被用于生产灭活脊髓灰质炎病毒疫苗(IPV)、口服脊髓灰质炎病毒活疫苗、狂犬病疫苗等。Vero细胞对各种病毒具有广泛的敏感性，据报道对于致癌性是安全的，并且根据世界卫生组织，不会对人类健康构成威胁，因此，基于Vero细胞的疫苗现可在全球范围内利用。

在使用动物细胞的常规疫苗生产中，在细胞增殖或用病毒感染细胞来增殖病毒的步骤中，通常使用添加了动物源性材料(例如血清、胰蛋白酶、白蛋白等)的培养基。特别是，血清中含有促进细胞存活和增殖的物质例如营养物、激素、生长因子和细胞因子，在细胞生长中发挥着重要功能，保护细胞免受物理损伤或剪切力，并且促进贴壁细胞在容器上粘附和铺展，因此具有将培养基模拟成类似于体内环境的优点。然而，由于血清的化学组成的复杂性，血清具有缺点，例如难以生产均一的产品并因此为细胞生长提供了不同的变量、单价高、使用血清生产的疫苗被外来病原体感染的风险、以及需要复杂的下游工艺。

Vero细胞是贴壁细胞，通常在含有10％胎牛血清(FBS)的正常培养基中在附着于微载体上的同时进行培养。FBS中所含的主要组分是白蛋白，已知白蛋白是一种在细胞粘附中起重要作用的蛋白质。然而，由于血清培养基的上述缺点，出现了对减少血清或无血清培养基的需求。

发明内容

【技术问题】

因此，需要开发一种培养基，所述培养基的组成含有可以帮助细胞粘附并促进细胞生长的补充剂，以代替培养基中血清量的减少。

【技术解决方案】

本文所述的一个实施方式提供了一种用于培养Vero细胞的培养基组合物，所述培养基组合物包含1-7％(v/v)的新生小牛血清(NCS)、1-6g/L的水解物和1-6mg/L的胰岛素。

本文所述的另一个实施方式提供了一种培养Vero细胞的方法，所述方法包括在培养基组合物中培养Vero细胞，所述培养基组合物包含1-7％(v/v)的新生小牛血清(NCS)、1-6g/L的水解物和1-6mg/L的胰岛素。

本文所述的另一个实施方式提供了一种生产病毒的方法，所述方法包括在培养基组合物中培养Vero细胞，所述培养基组合物包含1-7％(v/v)的新生小牛血清(NCS)、1-6g/L的水解物和1-6mg/L的胰岛素。

附图说明

图1显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(1号实验)。

图2显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(2号实验)。

图3显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(3号实验)。

图4显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(4号实验)。

图5显示了在根据本文所述的一个实施方式的培养基条件下Vero细胞培养的结果(5号实验)。