[发明专利]重组C反应蛋白

说明书

在应用乳胶试剂的免疫测定中，提高CRP高浓度范围中的免疫测定的正确性。重组C反应蛋白，其为通过基因重组生产的C反应蛋白，该C反应蛋白的55％以上的N末端被焦谷氨酰化。

技术领域

本发明涉及通过基因重组技术生产的C反应蛋白(C-reactive protein；下文也显示为“CRP”)及其用途。更详细地，涉及变换了CRP的N末端结构的重组CRP、和应用该重组CRP的校准品、管理血清、和通过抗体抗原反应的CRP的定量方法。

背景技术

CRP是与肺炎球菌荚膜的C多糖显示沉淀反应的蛋白，此外由于是急性期蛋白的一种也已知为代表性的炎症标记物。在感染病和炎症性疾病中，由于CRP的血中浓度显著增加、此外伴随病情恢复急剧减少，CRP的定量成为各种疾病的重症程度的判定、治疗经过观察时的指标。健康人的血中的CRP浓度通常是0.3mg/dL以下，但对于炎症和炎症性疾病的患者的情形，在短时间急增至数百至数千倍。因此，在样品中的CRP测定中，需要正确测定低浓度至高浓度的广范围浓度的CRP。

作为临床检查领域中的血中CRP浓度的定量法，有利用抗原抗体反应的测定方法，已知酶免疫测定法、发光免疫测定法、乳胶免疫比浊法、免疫色谱法等。尤其地，在这些测定方法中，乳胶免疫比浊法由于操作简便且通过分析装置的测定可自动化而广泛用于日常检查。在乳胶免疫比浊法中，从应用浓度已知的校准品的校准曲线定量CRP浓度，此外该校准曲线的正确性通过管理血清的测定保证。

在上述的校准品和管理血清中，使用从腹水等人体液纯化的天然型CRP，但存在混入CRP以外的血清成分、对血中CRP浓度的测定造成影响的风险。此外，在CRP的分离、纯化阶段，由于处理成为生物体原料的人体液，也有病原性的二次感染的风险，制备中的安全性也有问题。进一步，人体液中的CRP含量中有偏差，从稳定供给方面也有问题。另一方面，利用微生物等的重组CRP由于不以人体液为原料，不存在来自人的血清成分的混入和二次感染的风险，因此，如果可以构建通过基因工程技术的重组蛋白的稳定表达系统，可以稳定供给靶蛋白。

关于通过微生物的重组CRP的表达，已经报告应用大肠杆菌和酵母等的成功实例(专利文献1，非专利文献1)。但是，在通过乳胶免疫比浊法的重组CRP浓度的测定中，在CRP高浓度范围，存在检测到比实际的CRP浓度低的测定值的问题。因此，在校准品和管理血清等中使用重组CRP作为诊断药原料中，需要提高CRP高浓度范围中的测定的正确性。

多种蛋白通过翻译后修饰引起化学特性或结构的变换。作为翻译后修饰之一，有谷氨酰胺或谷氨酸的羧基与氨基通过产生分子内缩合反应变换为焦谷氨酸的焦谷氨酰化。动植物具有大量通过焦谷氨酰化修饰的焦谷氨酰肽，存在β-淀粉样蛋白、胶原蛋白、IgG2等蛋白。CRP也是焦谷氨酰肽。但是，据报告，重组CRP中混合N末端保持为谷氨酰胺的那种、和变换为焦谷氨酸的那种(非专利文献2)。关于这样的CRP的N末端结构与乳胶免疫比浊法中的抗体抗原反应的关联，迄今没有报告。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：特开2000-14388号公报

非专利文献

非专利文献1：TOSHIO TANAKA et a1.，BIOCHEM BIOPHYS RES COMMUN.，295(2002)，p163-166

非专利文献2：临床检查，Vol.46，No.9，p973-981(2002年9月)

发明概述

发明要解决的问题

本发明的问题是，尤其在应用乳胶免疫比浊法的情形中，提高CRP高浓度范围中的测定的正确性。

用于解决问题的手段