[发明专利]纯化C1-INH的方法

说明书

本发明涉及纯化C1‑酯酶抑制剂(C1‑INH)、尤其是C1‑INH浓缩物的方法。

本发明涉及一种纯化C1-酯酶抑制剂(C1-INH)的方法，更具体地，涉及一种C1-INH浓缩物。

C1-INH是一种补体激活途径的蛋白质，它是血浆中存在的蛋白酶的抑制剂，通过与激活的C1r和C1s形成共价复合物来控制C1激活。它还“控制”重要的凝血酶，例如血浆前激肽释放酶、因子XI和XII，以及纤溶酶。

C1-INH缺乏例如与遗传性血管性水肿(HAE)相关，该疾病是由C1-INH缺乏(HAEI型)或C1-INH活性降低(HAEII型)引起的。C1-INH缺乏也可能由消耗C1-INH引起，这是由于血液接触表面(如心肺机中)时产生的酶的中和，但也可能是在启动凝血级联反应的疾病过程中，如在慢性疾病、特别是风湿性疾病的情形下出现的免疫复合物导致的。目前，C1-INH蛋白替代必须被视为预防或治疗急性HAE的金标准。这对于市售的人血浆衍生的C1-INH尤其如此，据报道，与在转基因兔中产生的、与人C1-INH蛋白不同的市售重组C1-INH相比，市售的人血浆衍生的C1-INH具有更天然的功能(Feussner et al.,Transfusion 2014Oct；54(10):2566-73,doi:10.1111/trf.12678)。已被考虑的其他治疗应用包括使用C1-INH预防、减少和/或治疗缺血再灌注损伤(参见WO2007/073186)。

从人血浆中分离和/或纯化C1-INH是一种已知的、但或多或少有些昂贵、特别是经常非常耗时的过程。从血浆中制备C1-INH的不同方法包括各种分离方法，例如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤、沉淀和疏水相互作用层析。单独使用这些方法中的任何一种通常不足以充分纯化C1-INH，特别是C1-INH浓缩物，因此在现有技术中已经提出了它们的各种组合。

EP0698616B描述了使用阴离子交换层析，然后进行阳离子交换层析。EP0101935B描述了沉淀步骤和疏水相互作用色谱在负模式下的组合，以达到以约20％产率获得90％纯度的C1-INH制剂。US5030578描述了PEG沉淀和jacalin-琼脂糖色谱以及负模式下的疏水相互作用色谱。

WO01/46219描述了一种方法，其中在酸性条件下(pH相应地设置为pH5.5)用阴离子交换剂将含C1-INH的起始材料处理两次。第一个离子交换步骤之后是PEG沉淀，然后是第二个离子交换步骤，就像在的生产中一样，已知它仍然包含ACT(参见Feussneret al.,Transfusion 2014Oct；54(10):2566-73,doi:10.1111/trf.12678)。

在用于治疗血管性水肿的四种市售C1-INH浓缩物中，三种是血浆来源的。它们以商品名和出售。这些C1-INH浓缩物是根据不同的专有工艺制备的(参见Feussner et al.,Transfusion 2014Oct；54(10):2566-73,doi:10.1111/trf.12678)。已知这些专有工艺分别涉及一系列步骤，包括但不限于：冷沉淀、离子交换色谱、沉淀、巴氏杀菌、超滤和/或渗滤和/或疏水相互作用色谱。这些多步骤过程是完善、稳健和可靠的。它们产生大量产物，其中可检测到的伴随蛋白质、特别是α-1-抗胰凝乳蛋白酶(ACT)的量很小。

尽管分子量仅为C1-INH的一半，但ACT在血浆衍生的C1-INH制剂(例如上述或)的制造过程中会进行共纯化。其中，(和)的ACT水平最低(Feussner et al.,Transfusion 2014Oct；54(10):2566-73,doi:10.1111/trf.12678)，即远低于5μg/IU C1-INH。

不言而喻，制造商力求提供尽可能纯净的产品。只要它们对实际最终产品的效果和安全性没有负面影响，微量的伴随蛋白质是可以接受的。但原则上，即使是微量的伴随蛋白质也是不需要的。