[发明专利]逆转血小板聚集的方法和组合物

说明书

本文提供了用于溶解在采集的血样中形成的血小板凝块的方法、相关组合物和试剂盒。本发明的方法、组合物和试剂盒可用于提高实验室环境中血样质量和血液测定准确度，尤其是在防止误诊诸如假性血小板减少症或假性白细胞增多症。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年5月9日提交的美国临时专利申请序列号US 62/845,807的优先权。上述申请的全部内容通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明总体上涉及血小板凝集，更具体地涉及用于逆转和/或抑制血样中血小板聚集的方法和组合物。

背景技术

血小板聚集是一种常见的实验室伪影，使得报告血小板计数复杂化或无法报告血小板计数。大多数血液学分析通过测定血小板的大小来计算其数量。特定大小范围之外的颗粒(例如，血细胞)被血小板通道忽略，并且不计为血小板。因此，当血样中的血小板由于伪影而聚集在一起时，仪器会排除这些血小板凝块并生成虚假的低血小板计数，称为假性血小板减少症(PTCP)，造成诊断错误、不必要的检查、患者焦虑，甚至不必要的血小板输注。

血小板聚集可能由各种潜在机制引起。例如，乙二胺四乙酸依赖性PTCP(EDTA-PTCP)在实验室中很常见，估计在住院患者中的患病率为0.1％至2％。原因在于，针对血小板表面糖蛋白(GP)IIb/IIIa上表位的自身抗体引起的血小板在采血管中离体凝聚。EDTA诱导GP IIb/IIIa的构象变化，使这些表位暴露并造成血小板聚集。有人建议在替代抗凝剂(诸如柠檬酸盐或肝素)中采集血样可能有助于预防EDTA-PTCP。然而，高达17％的EDTA-PTCP患者在用柠檬酸盐采集血样时也会出现这种现象。

据报道，可能存在造成血小板聚集的其他因素，包含不正确的采血方法(诸如毛细血管采血)、抽血延迟和将血样暴露在低温下。通过离体补充阿米卡星逆转血小板聚集。病毒感染或使用药物和药品也可能是血小板聚集的诱因。

最近的研究集中在预防血小板凝块形成或在体内溶解血小板凝块，以避免血栓栓塞发作。需要可用于逆转或溶解在所采集的血样中形成的血小板凝块的方法和组合物。本文提供的发明满足这些需求。

发明内容

本文提供了用于逆转血样中血小板聚集的方法、组合物和试剂盒。在某些实施例中，本文提供用于溶解血样中血小板凝块的方法。在一些实施例中，该方法包含使所述血样与能够减少所述血样中反应性Ca²⁺的螯合剂接触。在一些实施例中，通过将血液抽入盛有肝素的容器中来采集所述血样。

在一些方面，所述肝素是肝素锂(LiHep)。在一些方面，所述螯合剂包含乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐。在一些方面，所述螯合剂包含柠檬酸或其盐。在一些方面，通过使所述螯合剂与含有血小板凝块的所述血样接触来进行所述接触步骤。

在一些方面，所述螯合剂包含EDTA或其盐，并且通过将EDTA或其盐与所述血样接触至最终EDTA浓度不超过约20mM进行所述接触步骤。在一些方面，通过使EDTA或其盐与所述血样接触至最终EDTA浓度范围为约4mM至约20mM EDTA进行所述接触步骤。

在一些方面，所述螯合剂包含柠檬酸或其盐，并且其中通过使酸性柠檬酸盐葡萄糖(ACD)溶液与所述血样接触至最终ACD浓度范围为约5体积％至约20体积％进行所述接触步骤。在一些方面，在所述接触步骤之后，所述方法还包含向所述血样施加物理力。在一些方面，所述物理力选自涡旋、移液管吸取、超声处理、声学混合、机械振动(例如，摇动、倒置、搅拌)和本领域已知的其他合适形式的物理力。