[发明专利]用于冷冻保存免疫细胞的组合物和方法

说明书

本文提供了通过在冷冻前用PTD‑MYC融合蛋白(例如，HIV TAT‑MYC融合蛋白)预处理细胞来冷冻保存免疫细胞，如外周血单核细胞(PBMC)的组合物和方法。本文还提供了用于实施所述方法的试剂盒。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年4月8日提交的美国临时专利申请第62/830,950号的优先权的权益，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本技术涉及通过在冷冻前用PTD-MYC融合蛋白(例如，HIV TAT-MYC融合多肽)预处理细胞来冷冻保存免疫细胞，如外周血单核细胞(PBMC)的组合物和方法。本文还提供了用于实施所述方法的试剂盒。

背景技术

冷冻保存是一种通过将细胞冷却至低的温度而对细胞进行保存的过程。在这些低的温度下，生物活性(包括在正常条件下会导致细胞死亡的生化反应)被有效地阻止。然而，如果控制不当，冷冻保存可以导致细胞损伤和细胞存活率的下降。此外，在冷冻-解冻过程之后，通常需要培养细胞以确保适当的恢复。目前，对于在冷冻保存的细胞已经被解冻后增加细胞存活率和恢复的冷冻保存方法存在未满足的需求。

发明内容

在一个方面中，本公开提供了一种冷冻组合物，其包括：(a)MYC融合多肽，所述MYC融合多肽包含(i)蛋白质转导结构域，(ii)MYC多肽序列；和(b)从供体受试者分离的一或多种外周血单核细胞(PBMC)，其中与从受试者分离的对照PBMC细胞相比，所述组合物表现出增加的细胞存活率。在一些实施例中，蛋白质转导结构域序列是TAT蛋白质转导结构域序列。在一些实施例中，蛋白质转导结构域是TAT_[48-57]。在一些实施例中，蛋白质转导结构域是TAT_[57-48]。在一些实施例中，MYC融合多肽包含SEQ ID NO:1。在一些实施例中，所述一或多种外周血单核细胞包含T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、粒细胞、巨噬细胞或其任意组合。在一些实施例中，组合物进一步包括细胞悬浮液培养基。在一些实施例中，细胞悬浮液培养基包含CHB培养基、CS5培养基或CS10培养基。在一些实施例中，在冷冻-解冻循环后与不存在MYC融合多肽的对照PBMC相比，所述组合物在解冻时表现出增加的细胞恢复。在一些实施例中，在冷冻-解冻循环后与不存在MYC融合多肽的对照PBMC相比，所述组合物在细胞活化后表现出增加的CD25表达。在一些实施例中，本公开提供了一种包含冷冻组合物的免疫细胞库。

在一个方面中，本公开提供了一种冷冻保存外周血单核细胞(PBMC)的方法，所述方法包括(a)使包含从供体受试者分离的一或多种PBMC的组合物与有效量的MYC融合多肽接触，所述MYC融合多肽包含(i)蛋白质转导结构域；(ii)MYC多肽序列；和(b)将PBMC冷却到足以冷冻所述组合物的温度。在一些实施例中，蛋白质转导结构域序列是TAT蛋白质转导结构域序列。在一些实施例中，蛋白质转导结构域是TAT_[48-57]。在一些实施例中，蛋白质转导结构域是TAT_[57-48]。在一些实施例中，MYC融合多肽包含SEQ ID NO:1。在一些实施例中，所述一或多种外周血单核细胞包含T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、粒细胞或其任意组合。在一些实施例中，所述方法进一步包括将PBMC悬浮在细胞悬浮液培养基中。在一些实施例中，细胞悬浮液培养基包含CHB培养基、CS5培养基或CS10培养基。

在一些实施例中，使包含一或多种PBMC的组合物与浓度为约0.5μg/mL至约500μg/mL的MYC融合多肽接触。在一些实施例中，使包含一或多种PBMC的组合物与浓度为约0.5μg/mL至约10μg/mL的MYC融合多肽接触。在一些实施例中，在步骤(b)之前，使包含一或多种PBMC的组合物与MYC融合多肽接触少于24小时。在一些实施例中，在步骤(b)之前，使包含一或多种PBMC的组合物与MYC融合多肽接触约1小时。在一些实施例中，在步骤(a)之后且在步骤(b)之前，洗涤PBMC。