[发明专利]CRISPR-Cas效应子多肽及其使用方法

权利要求书

1.一种组合物，所述组合物包含：

a)CRISPR-Cas效应子多肽，或编码所述CRISPR-Cas效应子多肽的核酸分子，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽包含与图6A至图6BB中任一者中所描绘的氨基酸序列具有50％或更高氨基酸序列同一性的氨基酸序列；和

b)CRISPR-Cas效应子指导RNA，或一种或多种编码所述CRISPR-Cas效应子指导RNA的DNA分子。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽包含与图6A至图6BB中任一者中所描绘的氨基酸序列具有80％或更高氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

3.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述CRISPR-Cas效应子指导RNA包含与图7中所描绘的crRNA序列中的任一者具有80％、90％、95％、98％、99％或100％核苷酸序列同一性的核苷酸序列。

4.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽与核定位信号(NLS)融合。

5.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含脂质。

6.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中a)和b)在脂质体内。

7.如权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中a)和b)在颗粒内。

8.如权利要求1-7中任一项所述的组合物，所述组合物包含以下一项或多项：缓冲剂、核酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。

9.如权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽包含与图6A至图6BB中任一者中所描绘的氨基酸序列具有85％或更高同一性的氨基酸序列。

10.如权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽是仅能切割双链靶核酸分子的一条链的切口酶。

11.如权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽是无催化活性的CRISPR-Cas效应子多肽(dCRISPR-Cas效应子)。

12.如权利要求10或权利要求11所述的组合物，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽在RuvC-I结构域、RuvC-II结构域和RuvC-III结构域中的一者或多者中包含一个或多个氨基酸取代。

13.如权利要求1-12中任一项所述的组合物，所述组合物还包含DNA供体模板。

14.一种CRISPR-Cas效应子融合多肽，所述CRISPR-Cas效应子融合多肽包含：与异源多肽融合的CRISPR-Cas效应子多肽，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽包含与图6A至图6BB中任一者中所描绘的氨基酸序列具有50％或更高氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

15.如权利要求14所述的CRISPR-Cas效应子融合多肽，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽包含与图6A至图6BB中任一者中所描绘的氨基酸序列具有80％或更高同一性的氨基酸序列。

16.如权利要求14所述的CRISPR-Cas效应子融合多肽，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽包含与图6A至图6BB中任一者中所描绘的氨基酸序列具有85％或更高同一性的氨基酸序列。

17.如权利要求14-16中任一项所述的CRISPR-Cas效应子融合多肽，其中所述CRISPR-Cas效应子多肽是仅能切割双链靶核酸分子的一条链的切口酶。