[发明专利]包含互补部分的修饰寡核苷酸的制造方法

权利要求书

1.包含长度为11～27个碱基的互补部分的修饰寡核苷酸的制造方法，其中，

该方法包括：在寡核苷酸连接酶的存在下，对合计4个以上的寡核苷酸原料片段进行处理而生成该修饰寡核苷酸，

合计4个以上的寡核苷酸原料片段相当于将该修饰寡核苷酸在满足下述条件(i)～(v)的片段连接部进行切割的情况下得到的寡核苷酸原料片段：

(i)在互补部分的各链侧中分别存在1个以上的片段连接部，并且在该修饰寡核苷酸中存在合计2个以上的片段连接部；

(ii)将该修饰寡核苷酸在片段连接部进行切割的情况下，在互补部分中形成突出末端，并且该突出末端的长度为1～10个碱基；

(iii)至少1个寡核苷酸原料片段包含修饰核苷酸；

(iv)该合计4个以上的寡核苷酸原料片段中的4个寡核苷酸原料片段包含长度为5～25个碱基的互补部分；并且

(v)与寡核苷酸原料片段的互补部分的各链侧对应的碱基长度的合计均为11～27个碱基长度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，(ii)中的突出末端的长度为2～6个碱基。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，(iv)中规定的4个寡核苷酸原料片段的互补部分中的除突出末端以外的部分的长度为4～16个碱基。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，寡核苷酸连接酶为RNA连接酶。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，寡核苷酸连接酶为双链RNA连接酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，双链RNA连接酶为Rnl2家族或Rnl5家族的RNA连接酶。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，修饰寡核苷酸包含修饰型核苷酸残基。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，修饰型核苷酸残基为：1'、2'、3'或4'化学修饰型核苷酸残基、5'-或3'-磷酸基修饰型核苷酸残基、交联型修饰型核苷酸残基、载体添加修饰型核苷酸残基、或者糖骨架取代型核苷酸残基。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，修饰型核苷酸残基为下列残基：

i)1'、2'、3'或4'位被C_1～6烷基氧基C_1～6亚烷基、-O-C_1～6烷基、-O-C_6～14芳基、-C-芳基、卤素原子、-O-C_1～6烷基N-酰胺C_1～6亚烷基、-O-C_1～6烷基-(C_1～6烷基-)氨基-C_1～6亚烷基、或-O-氨基C_1～6烷基取代的1'、2'、3'或4'化学修饰型核苷酸残基，

所述-O-氨基C_1～6烷基例如是-O-氨基丙基、-O-AP；

ii)羟基可被保护基取代的、被-O-P(S)(OH)₂、-NH-P(O)(OH)₂、或-NH-P(S)(OH)₂取代的5'-或3'-磷酸基修饰型核苷酸残基；

iii)2'位和4'位被2'-O-C_1～6亚烷基-4'、2'-O-亚乙基-4'、2'-O-甲基取代亚甲基-4'、2'-O-C_1～6亚烷基-O-C_1～6亚烷基-4'、2'-O-N(R)-C_1～6亚烷基-4'、2'-N(R)-C(O)-4'、2'-NH-C_1～6亚烷基-4'、或2'-C_1～6亚烷基-4'取代，或者3'位和5'位被3'-C_1～6亚烷基-5'取代的交联型修饰型核苷酸残基，

在此，R表示甲基、氢原子或苄基；或者

iv)己糖醇核酸(HNA)残基、环己烯基核酸(CeNA)残基、或吗啉代核酸(PMO)残基。